Evaluación de la expresión de Citocromo P450 1A y P-glicoproteína por real time RT-PCR en distintos órganos de Jenynsia multidentata expuesta a lindano

AMÉ, MARÍA VALERIA; GALANTI, LUCAS NICOLÁS; WUDERLIN, DANIEL ALBERTO

Mar del Plata

Congreso; II Congreso Argentino de la Sociedad de Toxicología y Química Ambiental (SETAC); 2008

SETAR ARGENTINA

Lindano (g-hexaclorociclohexano) es un plaguicida organoclorado cuyo uso ha sido restringido mundialmente por el posible efecto tóxico que puede causar a la salud humana y al medioambiente. Sin embargo, la presencia de este tóxico ha sido recientemente corroborada en sedimentos del Río Suquía (Córdoba, Argentina). Estudios previos mostraron que la enzima de biotransformación Citocromo P450 1A (CYP1A) y la P-glicoproteína de membrana involucrada en la eliminación de compuestos xenobióticos desde el interior celular (P-gp) podrían sufrir cambios en su expresión en la especie autóctona Jenynsia multidentata al ser expuesta a lindano. Sin embargo, los resultados obtenidos previamente no mostraron significancia estadística entre individuos expuestos y controles. Posiblemente esta falta de diferencia significativa se haya debido a la baja sensibilidad metodología utilizada. El objetivo de este trabajo fue evaluar la expresión de CYP1A y P-gp en distintos órganos de J. multidentata expuesta a lindano utilizando RT-PCR en Tiempo Real, buscando un método más eficiente para predecir cambios a nivel de macromoléculas inducidos por tóxicos ambientales. Para tal fin, se realizaron exposiciones de J. multidentata a 25 µg L-1 de lindano por 1, 6, 12 y 24 h. Se procesaron en paralelo peces control y, como control positivo, se expusieron 3 individuos a 10 µg L-1 de Aroclor 1254 por 24 h. Una vez obtenido el ARN de hígado, branquias y cerebro se realizó la transcripción reversa con oligo(dT)15. Se diseñaron oligonucleótidos a partir de secuencias conocidas de CYP1A, P-gp y B-actina (gen control) de J. multidentata y se evaluó la expresión de estas proteínas por PCR en Tiempo Real. La expresión relativa de los genes en estudio se calculó según el método de Pfaffl. En hígado de J. multidentata se observó una inhibición significativa de CYP1A a partir de las 6 h que se mantuvo hasta las 24 h y, un aumento significativo de P-gp desde las 6 h con un máximo a las 12 h. La expresión de ambas proteínas mostró un aumento significativo a las 24 h en branquias, observándose resultados similares en cerebro. Estos resultados muestran una respuesta específica de tejido, indicando que en todos ellos se activa la expresión P-gp como mecanismo de defensa frente a la presencia de lindano, y que este compuesto puede ser biotransformado en branquias y cerebro por CYP1A. Considerando reportes de otros autores, podemos suponer que en hígado la principal vía de detoxificación es a través de de Glutatión S-transferasa. Estos resultados sugieren que P-gp y CYP1A medidos por RT-PCR en Tiempo Real en J. multidentata podrían utilizarse como biomarcadores tempranos de contaminación.