Cryptococcus neoformans y C. gattii modulan la producción de óxido nítrico, TGF y actividad de arginasa por macrófagos alveolares de rata

LAURA S. CHIAPELLO, ANA P. GARRO, SPESSO MARÍA F, DIANA T. MASIH.

La Falda, Córdoba

Jornada; LVI Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2008

Sociedad Argentina de Inmunología

La criptococosis se produce por inhalación de levaduras o basidiosporas de Cryptococcus neoformans o C. gattii. La persistencia de las levaduras en el hospedador depende de su capacidad para sobrevivir a la actividad microbicida de los macrófagos. El objetivo de este trabajo fue estudiar la capacidad de levaduras de C. neoformans (Cn) y C. gattii (Cg) para modular la activación de macrófagos alveolares (Ma) de rata. Cryptococcus neoformans (cepas 102/85 UNC y HC6 UFRGS) y C. gattii (cepa NIH 112B) se cultivaron en agitación por 24 h. Las levaduras fueron lavadas con PBS y ajustadas a 108/ml. Levaduras muertas se obtuvieron por tratamiento con paraformaldehído al 2% y levaduras vivas o muertas, fueron opsonizadas con un anticuerpo monoclonal anticápsula. Los Ma se obtuvieron de ratas Wistar por lavados bronqueoalveolares con PBS-EDTA, luego de 3 h de adherencia en DMEM al 10% de suero fetal bovino y 5 mg/ml de LPS. Luego de dos lavados con DMEM, los Ma adherentes fueron  incubados por 24 h con levaduras de Cn o Cg, vivas o muertas, opsonizadas o sin opsonizar en una relación 1:2 (Ma:levaduras). Se observó que los Ma sólo fagocitaban levaduras opsonizadas de ambas especies. Se determinó la producción de óxido nítrico (NO) por reacción de Griess, TGFb por ELISA de captura y la actividad de arginasa mediante la producción de urea en lisados celulares. Los resultados demuestran que levaduras vivas de C. neoformans y C. gattii suprimen significativamente la producción de NO por Ma preactivados con LPS (controles: 294± 0,4 mM; Cn: 139±0,3 mM; Cg: 157±1 mM; p < 0,05; control vs Cn o vs Cg). Por el contrario, ambas especies incrementaron la actividad de arginasa de los Ma, pero se observó una actividad enzimática mayor en Ma incubados con C. gattii (mgUrea/mg proteína de control: 0,77±0,4; Cn: 0,92±0,1; Cg: 1,21±0,02; P < 0,05; Cg vs control). De manera similar, C. neoformans y C. gattii estimularon un aumento significativo en la producción de TGFβ por los Ma activados. La modulación de NO, arginasa y TGFβ no fue inducida por levaduras muertas y fue independiente de la fagocitosis (TGFβ [pg/ml] control: 49±27; Cn: 119±17; Cn opsonizado: 115±25; Cn muerto: 62,7±11; Cn muerto opsonizado: 32±6)  y del bloqueo de receptores que unen el polisacárido capsular, CD32 y CD18. Estos resultados muestran que C. neoformans y C. gattii pueden modular la activación de macrófagos alveolares de una manera que podría favorecer su persistencia en el huésped infectado.