AGONISTAS DE TLR7 TIENEN CAPACIDAD ADYUVANTE SOBRE LA ACTIVACIÓN DE LINFOCITOS T CD8+

MARIA INES CRESPO; MIGUEL LEANDRO RUFAIL; BELKYS ANGELICA MALETTO; MARIA CRISTINA PISTORESI; GABRIEL MORON

La Falda, Argentina

Congreso; LVI Reunion Cientifica de la Sociedad Argentina de Inmunologia; 2008

Sociedad Argentina de Inmunologia

El ARN de simple hebra (ARNsh) activa las celulas dendriticas (DCs) murinas a traves de TLR7. Previamente demostramos que BMDCs estimuladas con ligandos de TLR7 aumentan su capacidad de realizar presentacion cruzada de antigenos (Ag) exogenos in vitro. Se usaron tres agonistas de TLR7: Poly U, Imiquimod y Gardiquimod. Para estudiar si estos pueden estimular la presentacion cruzada en DCs esplenicas se realizo un estudio de presentacion in vitro utilizando el hibridoma de celulas T CD8+ B3Z, especifico para OVA257-264. DCs purificadas de bazo de ratones C57BL/6 incubadas con ovalbumina en forma de complejos inmunes en presencia de Gardiquimod produjo un aumento en la presentacion de OVA (hasta 25 veces, p<0,05) con respecto a las DCs sin estimulo. Para evaluar el efecto de los ligandos de TLR7 en el desarrollo de una respuesta especifica, se realizo un ensayo de induccion de citotoxicidad in vivo. Ratones C57BL/6 fueron inmunizados con perlas de latex unidas a OVA (perOVA) junto a Poly U estabilizado con DOTAP. Luego de 7 dias, los animales fueron inyectados con celulas blanco marcadas con CFSE. Los animales que fueron inmunizados con Poly U presentaron (98,0+/-0,6)% de lisis especifica (p<0,05). Estos resultados se correlacionan con la secrecion de IFN-gama por esplenocitos reestimulados in vitro. Para analizar la participacion de celulas T CD4+ en la induccion de respuesta citotoxica, se inmunizaron ratones en las mismas condiciones descriptas, depletados de estas celulas por inyecciones i.p. con anticuerpo antiCD4 (clon GK1.5). Como control se utilizaron ratones inyectados i.p. con IgG. Por citometria de flujo observamos, 0% de celulas CD3+ CD4+ en los animales depletados. Estos animales depletados presentaron una menor lisis especifica que los animales controles (p<0,05). Cuando se reestimularon los esplenocitos in vitro no se observo secrecion de IFN-gama los animales depletados, confirmando la necesidad de linfocitos T CD4+ para la induccion de linfocitos T CD8+ citotoxicos (CTLs). Para evaluar si la induccion de CTLs podria ser resultado de la estimulacion in vivo de DCs, se inmunizaron animales con DCs esplenicas estimuladas con Poly U/DOTAP + perOVA; 7 dias post-inmunizacion se observo 62% de lisis especifica, indicando la induccion de CTLs especificos. Estos resultados muestras que los ligandos de TLR7 utilizados tienen capacidad adyuvante sobre la activacion de linfocitos T CD8+, mediante la estimulacion de DCs y la cooperacion de linfocitos T CD4+.