PKCα Regula ZEB1 en Lineas Celulares de Cancer de Mama

LLORENS, MC; KAZANIETZ, MG; BARRIO-REAL, L; LOPEZ HABER, C; CABANILLAS, ANA MARIA

Buenos Aires

Congreso; Simposio Internacional Programa RAICES Red de Científicos Argentinos en el Noreste de EE.UU. ?Ganando la guerra contra el cáncer?; 2016

PROGRAMA RAICES

Laprogresión tumoral puede ser activada por señales de citoquinas que regulanfactores de transcripción como ZEB1 o Snail. Intentamos descubrir el rol de lavía de PKC en la regulación de ZEB1. Isoformas de PKC, ZEB1 y marcadores de EMT fuerondeterminados por inmunobloten 9 líneas celulares neoplásicas mamarias. PKCα y ZEB1 mostraron correlaciónpositiva significativa (p≤0.05). El silenciamiento de PKCα mediante 2siRNAredujo significativamente la expresión de ZEB1(72hs) en MDA-MB231 (siPKCα1,2: 0,64 ± 0,06 y 0,67 ± 0,06 vs siNonTarget SiNT:1)(p≤0,05), también en MDA-MB453,BT549 (72/96hs) y en MDA-MB-231(96hs), sin embargo el ARNm(qPCR) de ZEB1 no se modificó, sugiriendo que PKCα podría regular la estabilidad proteica de ZEB1. Lacapacidad invasiva (invasión en Matrigel®) de células MDA-MB231 silenciadas por6siPKCα o 4siZEB1 se redujo significativamente contra las células control  (siPKCα1,2,3,4,5,6: 40,3 ± 3,5; 52,6 ± 4,2;53,4 ± 2,6; 52,0 ± 2,8; 42,7 ± 2,4; 59,6 ± 3,1 vs SiNT: 83,1 ± 2,9)(p≤0.0001)(siZEB1 1,2,3,4: 25,2 ± 2,3; 31,0 ± 2,49; 80,3 ± 3,0; 39.7 ± 2.7 vs SiNT: 150,6± 3,9)(p≤0.0001). Evaluamos por tinciones de faloidina-rodamina la respuestadel citoesqueleto de actina ante un estímulo (10%SFB) en MDA-MB231/siPKCα osiZEB1. Las células control o siZEB1 mostraron lamelipodios y prolongacionescitoplasmáticas en respuesta al estímulo, mientras que las célulasMDA-MB231/siPKCα no respondieron al estímulo. Los resultados fueron expresadoscomo media±S.E.M.Los resultados sugierenque PKCα podría regular la expresión de ZEB1 en células neoplásicas mamariasmediante la modificación de su estabilidad proteica. La pobre formación delamelipodios presentada en MDA-MB231/siPKCα en comparación con la respuestanormal de MDA-MB231/siZEB1 sugiere que PKCα es capaz de regular la invasión mediante un mecanismodependiente de ZEB1 y otro independiente de ZEB1. PKCα es un regulador novel deZEB1 y por lo tanto de la invasión celular en cáncer de mama.