PRESENTACIÓN DE ANTÍGENOS EN LA CÁPSIDE DE LOS BACULOVIRUS: UNA ESTRATEGIA PARA DESPERTAR RESPUESTAS INMUNES CELULARES

PAULA MOLINARI; MARÍA INÉS CRESPO; MARÍA JOSÉ GRAVISACO; OSCAR TABOGA; GABRIEL MORÓN

La Falda, Argentina

Congreso; LVI Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2008

Sociedad Argentina de Inmunología

Actualmente, uno de los puntos de mayor dificultad en el desarrollo de vacunas de nueva generación exitosas se basa en la inducción de una fuerte y duradera respuesta celular de memoria. Los baculovirus (BVs) son una familia de virus que infectan artrópodos y son incapaces de replicarse en células de mamíferos. Tienen fuertes propiedades adyuvantes, promoviendo respuestas humorales y celulares contra los antígenos coadministrados mediante la producción de mediadores inflamatorios. Nuestro objetivo es evaluar la capacidad de presentación antigénica e inmunopotenciación de las respuestas inmunes celulares mediadas por BVs recombinantes y estudiar los mecanismos involucrados, usando ovoalbúmina (OVA) en la cápside como antígeno modelo.Se construyó un BV recombinante que porta una copia extra de la proteína VP39 de la cápside fusionada a OVA (OVA-BVs) bajo el promotor de poliedrina y se probó la colocalización e incorporación de la fusión OVA-VP39 a la partícula viral por Western blot e inmunomicroscopía electrónica. Para evaluar la capacidad de inmunopotenciación, se inyectaron ratones Balb/c por vía intravenosa con 1x107 de BVs y a las 6hs se obtuvieron muestras de suero. Por ensayos de ELISA se comprobó que los BVs indujeron la producción de 8±2 ng/ml INFγ y 0,8±0,1 ng/ml de IL-12p40 en sangre. Al mismo tiempo, por marcación intracitoplásmatica se detectó en los esplenocitos de ratones inoculados con BVs (vs PBS control) 1,63 % (0,20%)(P≤0,05) de células NK IFNγ+ y 0,35% (0,08%)(P≤0,05) de NKT IFNγ+. In vitro, por citometría de flujo se observó que BMCDs capturaron GFP-BVs luego de una incubación de 90´. BMDCs de ratones TLR4Ko y salvajes incubadas 18hs con BVs aumentaron la expresión de las moléculas CMH II, CD40 y CD86 y la secreción de IL-6 e IL-12. Finalmente, DCs esplénicas de ratones C57BL-6 incubadas con OVA-BV fueron capaces de presentar efectivamente el epitope CD8+ OVA257-264 a un hibridoma TCD8+.Los resultados obtenidos en este trabajo demuestran que los BVs serían capaces de potenciar una respuesta inmune celular debido a que inducen una fuerte producción INFγ in vivo, producido por las células NK y NKT y son endocitados específicamente por DCs induciendo su maduración. Además, se demostró la capacidad de los BVs para introducir antígenos heterólogos en la vía de procesamiento del CMH I para su presentación a células T CD8+, demostrando la potencialidad de los BVs como vectores de inmunización para el desarrollo de respuestas inmunes celulares.