PRESENTACIÓN DE ANTÍGENOS EN LA CÁPSIDE DE LOS BACULOVIRUS: UNA ESTRATEGIA PARA DESPERTAR RESPUESTAS INMUNES CELULARES

PAULA MOLINARI; MARÍA INÉS CRESPO; GABRIEL MORÓN; OSCAR TABOGA

Buenos Aires, Argentina

Congreso; IX Congreso Argentino de Virología; 2008

Sociedad Argentina de Virología

La vacunación es, en nuestros días, el método más eficaz para la prevención, control y erradicación de distintas enfermedades infecciosas. Actualmente, uno de los puntos de mayor dificultad en el desarrollo de vacunas de nueva generación exitosas se basa en la inducción de una fuerte y duradera respuesta celular de memoria. Una estrategia elegida para montar respuestas inmunes celulares se basa en el desarrollo de vectores virales o bacterianos replicativos y no replicativos. Los baculovirus (BVs) son una familia de virus que infectan artrópodos. Los BVs tienen fuertes propiedades adyuvantes, promoviendo las respuestas humorales y celulares contra los antígenos coadministrados, maduración de células dendríticas (CDs) y la producción de mediadores inflamatorios a través de mecanismos mediados principalmente por interferones (IFNs) de tipo I. La activación de las CDs es un paso central en la activación de los linfocitos T para el desarrollo de una respuesta celular. El perfil de una respuesta inmune depende del estímulo recibido por las CDs y la especificidad de los linfocitos que se estimulan depende de las secuencias particulares presentadas en la superficie de las CDs en el contexto de las moléculas del Complejo Mayor de Histocompatibilidad (MHC) clases I y II.El objetivo del presente trabajo es estudiar la presentación en el contexto de MHC I de un antígeno modelo, ovoalbúmina (OVA) transportado en la cápside de los BVs (VP39) por CDs.Se construyó un BVs recombinante que porta una copia extra de VP39 fusionada a OVA bajo el promotor de poliedrina por la metodología de Bac to Bac y se estudió la colocalización e incorporación de la proteína de fusión OVAVP39 a la partícula viral por Western blot e inmunomicroscopía electrónica. Los ensayos de Western blot mostraron que OVAVP39 colocaliza con los BVs. Las imágenes tomadas por ME de los BVs-OVA, con un anticuerpo anti-OVA, mostraron que la proteína recombinante forma parte de la cápside viral y que al menos una parte de OVA queda expuesta hacia el lumen entre la cápside y la envoltura. Para estudiar la presentación por CDs se evaluó en primer lugar, la capacidad de las CDs derivadas de médula ósea (BMCDs) de capturar los BVs. Para ello, se incubaron BMCDs con diferentes cantidades de BV-GFP y se evaluó por citometría de flujo (FACs) la presencia de fluorescencia verde en la población CD11c+. Se observó un aumento de la endocitosis de los BVs-GFPs por las BMDC conforme aumenta su proporción (moi) BVs/BMCDs, que se observa tanto como elevación de la intensidad media de fluorescencia (IMF) de la población CD11c+, como por porcentaje de BMCDs con fluorescencia verde (GFP). Luego, se estudió la maduración de las CDs determinando la expresión de citoquinas y moléculas coestimulatorias. BMCDs incubadas con distintas concentraciones de BVs aumentaron gradualmente las moléculas marcadoras de maduración fenotípica MHCII, CD40 y CD86, como también la producción de las citoquinas IL-6 e IL-12. Finalmente, se estudió si el epitope CD8+ OVA257-264 era presentado en MHC I por CDs purificadas de bazo mediante la activación del hibridoma B3Z (hibridoma T CD8+ específico para el epitope OVA257-264). Los resultados mostraron activación de las células B3Z cuando las CDs esplénicas fueron incubadas con BVs-OVA y no con el BV salvaje, indicando que al menos el epitope CD8+ OVA257-264 fue presentado en el contexto MHC I. Los resultados obtenidos en este trabajo demuestran que las CDs pueden endocitar baculovirus recombinantes y a partir de allí madurar y presentar antígenos a células T CD8+, mostrando el potencial de los baculovirus como vector de inmunización.