CIBICI   14215
CENTRO DE INVESTIGACION EN BIOQUIMICA CLINICA E INMUNOLOGIA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Evaluación de la toxicidad de extractos de esporas del hongo Thecaphora frezii, en cultivos de células eucariotas.
Autor/es:
MARY, VS; OTAIZA GONZÁLEZ, SN; ARIAS, SL; RUBINSTEIN, HR; THEUMER, MG
Lugar:
General Cabrera, Córdoba
Reunión:
Jornada; XXX Jornada Nacional del maní; 2015
Institución organizadora:
INTA General Cabrera, Centro de Ingenieros Agrónomos de General Cabrera y zona.
Resumen:
IntroducciónDurante la campaña agrícola 1994/95 se detectaron por primera vez en Argentina, frutos de maní con carbón, provenientes de la región centro-norte del área manisera de Córdoba. Esta patología es producida por el hongo Thecaphora frezii, el cual actualmente se ha diseminado y la afección se registra en toda el área manisera de Córdoba, con incidencias y prevalencias variables entre campañas y distintas regiones; aunque la severidad del problema en general es mayor en la región norte de la provincia.Además de las grandes pérdidas económicas que causa el carbón por T. frezii en toda la cadena de comercialización del maní, partiendo desde el productor, es necesario tener en cuenta que la ingesta de maní o de sus productos derivados contaminados con las esporas de dicho hongo, llamadas teliosporas, podrían causar efectos tóxicos en el público consumidor, aunque en la actualidad disponemos de información toxicológica muy escasa que avale o descarte de plano esta aseveración. En estudios previos realizados por nuestro grupo de investigación se observó que el consumo subcrónico de maní infectado con T. frezii no afectó el perfil nutricional (peso y ganancia de peso), hematológico, bioquímico (función hepática y renal) ni histológico (análisis histopatológico de hígado, bazo, pulmón y riñón) de ratas Wistar. Sin embargo, debido a que la susceptibilidad o resistencia de distintas especies a la toxicidad de las teliosporas puede ser diferente, el objetivo del presente trabajo fue evaluar la citotoxicidad de extractos de teliosporas en células humanas cultivadas in vitro.Materiales y MétodosSe prepararon tres extractos de teliosporas con hexano (E-Hex), acetato de etilo (E-AcEt), y metanol (E-MeOH), a los fines de separar los compuestos liposolubles, de polaridad intermedia, y los compuestos más polares, respectivamente. Para esto se utilizaron teliosporas purificadas a partir de maní contaminado, cosechado en la campaña 2013-2014. Los extractos fueron evaporados a sequedad bajo corriente de nitrógeno, redisueltos en dimetilsulfóxido (DMSO), esterilizados por filtración y conservados a 4 °C hasta su utilización. El estudio se realizó en líneas celulares humanas de origen hepático (HepG2) y de epitelio de colon (Caco-2), muy utilizadas en toxicología debido a que permiten evaluar los efectos citotóxicos sobre los blancos de acción principales de toxinas que ingresan por vía oral. Las células fueron sembradas en placas de 96 pocillos (104 células/pocillo) y cultivadas en medio de cultivo DMEM (enriquecido con 10 % de suero fetal bovino, 2 mM de glutamina y 50 μg/mL de gentamicina), al que se le adicionó distintas concentraciones (0,1; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 y 1 %) de E-Hex, E-AcEt, E-MeOH o DMSO, durante 48 h a 37 °C y 5 % de CO2.La viabilidad celular se determinó por la habilidad de las células para convertir bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio (MTT) en cristales de formazán por medio de la enzima mitocondrial succinato-deshidrogenasa. Brevemente, el medio de cultivo se reemplazó por una solución de MTT (0,5 mg/mL) en DMEM enriquecido, que luego de una hora fue removida y el formazán fue solubilizado con DMSO. La intensidad del color (evaluada por espectrofotometría a 595 nm) es proporcional al formazán sintetizado y al número de células viables. Resultados y discusiónLa viabilidad de las células Caco-2 y HepG2 no fue significativamente afectada por ninguna de las concentraciones de los extractos (E-MeOH, E-AcEt y E-Hex) de teliosporas estudiadas. Estos resultados estuvieron de acuerdo con estudios previos realizados en ratas Wistar alimentadas durante 180 días con maní contaminado con teliosporas, en los cuales no se observaron cambios en la histología ni en la función hepática de las ratas.Debido a que es conocido el efecto tóxico inducido por DMSO en bacterias y células de origen animal o humano, el rango de concentraciones utilizadas de este disolvente universal fue testeado en los dos tipos de células estudiados para poder realizar una correcta interpretación de los resultados. El porcentaje de células viables en ambas líneas celulares fue significativamente reducido por DMSO en el rango 0,4 - 1 %, manteniéndose la viabilidad alrededor del 80 %. Este porcentaje es aceptable ya que para poder evaluar citotóxicidad es necesario tener al menos 70 - 80 % de células viables. ConclusionesLos extractos metanólicos, con acetato de etilo y con hexano, de teliosporas no producen efectos citotóxicos en el rango 0,1 -1 %, en las líneas celulares humanas Caco-2 y HepG2. En función de estos resultados, el rango de concentraciones de los extractos de teliosporas evaluado es adecuado para realizar estudios toxicológicos.