CIBICI   14215
CENTRO DE INVESTIGACION EN BIOQUIMICA CLINICA E INMUNOLOGIA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
TRANSPORTE DE DELTAMETRINA EN TRIATOMA INFESTANS
Autor/es:
DULBECCO A; MIJAILOSKY S; CALDERÓN FERNÁNDEZ G; LEYRIA J; QUINTANILLA MF; CANAVOSO LE; JUÁREZ MP
Lugar:
Posadas, Misiones
Reunión:
Congreso; IX Congreso Argentino de Entomología; 2015
Institución organizadora:
Sociedad de Entomología Argentina
Resumen:
Los insecticidas de contacto son compuestos lipofílicos que ingresan a diversos tejidos blanco luego de penetrar a través de la cutícula. Sin embargo, son muy escasos los estudios sobre los mecanismos de transporte involucrados durante las etapas iniciales de intoxicación. Algunas evidencias sugieren que ciertos insecticidas pueden ser ligados por lipoproteínas. En Triatoma infestans, así como en otros insectos, se ha demostrando la presencia de 3 fracciones lipoproteicas de alta y muy alta densidad (HDLp, VHDL1 y VHDL2 respectivamente) siendo la HDLp (lipoforina) la principal responsable del transporte de lípidos (Fichera y Brenner 1982). Estudios previos de este laboratorio demostraron el rol del integumento de T. infestans en el mecanismo de resistencia a insecticidas y en particular como barrera a la penetración de deltametrina (Juárez et al. 2010). El objetivo de este trabajo fue avanzar en la comprensión de la vía de transporte del insecticida y el rol del integumento en la interacción insecto‐insecticida. Se emplearon insectos adultos de T. infestans para la extracción de hemolinfa, la que fue incubada en presencia de deltametrina para investigar la afinidad de este piretroide con las lipoproteínas (Lp) hemolinfáticas. Las Lp fueron fraccionadas mediante ultracentrifugación en gradiente de densidad de bromuro de sodio. Se determinó la presencia del piretroide en las fracciones colectadas mediante microextracción en fase líquida (LPME) con fibras huecas (HF) y análisis por cromatografía gaseosa con detector de captura electrónica (CGC‐EAD). Los insectos fueron obtenidos de una colonia susceptible y una colonia resistente a piretroides. A partir de RNA total de tejido epidérmico de T. infestans se llevó a cabo la secuenciación de alto rendimiento del transcriptoma en plataforma 454 GS FLX. Con el objetivo de evaluar la localización de la lipoforina en el tejido integumentario, se realizaron ensayos de inmunofluorescencia directa en criosecciones de tejido obtenidos a partir de las placas esternales de los insectos. Se empleó un anticuerpo anti‐HDLp conjugado con isotiocianato de fluoresceína (FITC) en tanto la identificación de núcleos se realizó con DAPI. El análisis se efectuó mediante microscopía láser confocalizada (Olympus FV1000). La cuantificación de la deltametrina en las fracciones obtenidas por ulltracentirfugación evidenció que más del 90% de la deltametrina es ligada por HDLp y VHDL1, siendo HDLp la principal responsable de su transporte. No se observaron diferencias significativas entre insectos susceptibles y resistentes a deltametrina. De las secuencias obtenidas a partir del transcriptoma, se detectaron numerosos genes relacionados con el metabolismo y transporte de lípidos. Entre estos, dos genes codificantes de receptores de lipoforina y tres de apolipoforinas. Los ensayos de inmunofluorescencia demostraron la presencia de lipoforina en la membrana basal y región sub-epidérmica del integumento. Analizados en conjunto, estos resultados preliminares sugieren que la acumulación del insecticida en un complejo lipoproteico dificultaría la accesibilidad del mismo a sistemas de degradación enzimática, favoreciendo su transporte hacia los sitios de acción. Además, la presencia de receptores para lipoforina y la detección de esta lipoproteína en la membrana basal del tejido epidérmico sugieren la posible interacción integumento-lipoproteínas con un transporte bidireccional de lípidos y sustancias lipofílicas hacia otros tejidos.