REGULACION DE LA FUNCIÓN DEL DOMINIO ANINOTERMINAL DE ZEB1 EN EL PROCESO DE TRANSICIÓN EPITELIO MESENQUIMATOSA

LLORENS DE LOS RIOS C; CAVALLO N; VAGLIENTI, M. VICTORIA; CABANILLAS, AM

Mar del Plata

Congreso; LX REUNIÓN DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE INVESTIGACIÓN CLÍNICA (SAIC); 2015

SOCIEDAD ARGENTINA DE INVESTIGACIÓN CLÍNICA (SAIC)

ZEB1 (Zinc Finger E-box Binding Homeobox) factor de transcripción involucrado en la diferenciación celular,transición epitelio mesenquimatosa (EMT) y metástasis; EMT no solo facilita la metástasis sino también promueveotros aspectos de la progresión del cáncer, un número creciente de estudiosdemuestran que EMT puede ser un predictor de resistencia a la quimio terapia enpacientes con cáncer de mama, por lo tanto, la inhibición de las víasmoleculares que regulan la EMT ofrecerá un medio eficaz para la prevención dela metástasis del cáncer de mama. En trabajos previos hemos identificado y descripto un pequeñofragmento de la región aminotermial de ZEB1 de 130 amino ácidos capaz de inducir EMT por sí solo, cuando es sobreexpresado en células epiteliales normalesde mama de ratón NMuMG, sin la necesidad de estímulos externos como TGFβ. Continuandocon esta línea  nuestro Objetivo es determinar las vías deseñalización capaces de regular la función de NZEB1 en un contexto de EMT. Células NMuMG-NZEB1 fuerontratadas con diferentes activadores e inhibidores específicos de vías deseñalización durante 48hs. DMSO 1% SFB, IGF1 10nM, EGF 50nM/mL, TGFβ 5ng/mL y PMA 10ng/ml IONO 10ng/ml, Calphostin C 50 nM, LY294002 20 µM, PD 98059 20 µM, UO126 20 µM, UO 12420 µM, NVP-AEW541 5µM y LiCl 50 mM. Los Extractos celulares totales fueron corridos porWB y revelados con anti-GFP, anti N-ZEB1, anti E-cadherina y α-tubulina como control, también de corroboró elfuncionamiento de las vías de AKT, MEK/ERK. Los resultaos revelaron que los estímulos o inhibiciones de vías de señalización utilizados norevierten el efecto de N-ZEB1 sobre la expresión de E-Cadherina mediante losestímulos o inhibiciones de vías de señalización utilizados, sin embargo los tratamientos con NVP-AEW541, inhibidor delreceptor de IGF1 disminuyó de manera significativa la expresión proteica de N-ZEB1 (P<0.05). Con el objetivo dedeterminar si la caída de N-ZEB1 tiene repercusión sobre otros marcadores deEMT células NMuMG-NZEB1 y/o vector fuerontratadas con DMSO 1% SFB o NVP-AEW541 5µM por48 hs, se determinó por Microscopía confocal e IF la expresión y localizaciónsubcelular de los filamentos de F-actina y se evaluó la capacidad migratoria mediante elensayo de Wound Healing e invasiva mediante el ensayo de invasión en matrigel.Los resultados revelaron que  Las células NMuMG-NZEB1 tratadas con NVP, presentan tendencia areorganizar los filamentos de actina de manera cortical, tendiendo a unaorganización similar a células epiteliales, coinsidentemente también presentan una marcada disminución de la capacidad de migrar e invadir después deltratamiento con NVP en comparación con las células NMuMG vector (P<0.001). Posteriormente se determinó si lainhibición de la vía de IGF1-R regula la estabilidad de N-ZEB1 mediante la víadel proteasoma, células NMuMG-NZEB1 fueron tratadas con NVP-AEW541 5µM y/o MG 132 5µM durante 48 hs. Los Extractos celulares totales fueroncorridos por WB y revelados con anti N-ZEB1 y α-tubulina comocontrol. Se observó que cuando la vía del proteasoma esta inhibida, la inhibiciónde la vía de IGF1R no conduce a una caída de la expresión proteica de N-ZEB1anteriormente observada, por lo tanto la vía de IGF1R, podríaser capaz de regular la función de NZEB1 durante el proceso de EMT, mediante laregulación de la estabilidad proteica de dicho factor, mediante la vía delproteasoma.