Cryptococcus neoformans y C. gattii modulan la producción de Oxido nítrico, TGFbetta y actividad de arginasa por macrófagos alveolares de rata.

CHIAPELLO, LS; GARRO, AP; SPESSO, F; MASIH, DT

La Falda-Córdoba-Argentina

Jornada; LIII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2008

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La criptococosis se produce por inhalaci¨®n de levaduras o basidiosporas de Cryptococcus neoformans o C. gattii. La persistencia de las levaduras en el hospedador depende de su capacidad para sobrevivir a la actividad microbicida de los macr¨®fagos. El objetivo de este trabajo fue estudiar la capacidad de levaduras de C. neoformans (Cn) y C. gattii (Cg) para modular la activaci¨®n de macr¨®fagos alveolares (Ma) de rata. Cryptococcus neoformans (cepas 102/85 UNC y HC6 UFRGS) y C. gattii (cepa NIH 112B) se cultivaron en agitaci¨®n por 24 h. Las levaduras fueron lavadas con PBS y ajustadas a 108/ml. Levaduras muertas se obtuvieron por tratamiento con paraformaldeh¨ªdo al 2% y levaduras vivas o muertas, fueron opsonizadas con un anticuerpo monoclonal antic¨¢psula. Los Ma se obtuvieron de ratas Wistar por lavados bronqueoalveolares con PBS-EDTA, luego de 3 h de adherencia en DMEM al 10% de suero fetal bovino y 5 mg/ml de LPS. Luego de dos lavados con DMEM, los Ma adherentes fueron  incubados por 24 h con levaduras de Cn o Cg, vivas o muertas, opsonizadas o sin opsonizar en una relaci¨®n 1:2 (Ma:levaduras). Se observ¨® que los Ma s¨®lo fagocitaban levaduras opsonizadas de ambas especies. Se determin¨® la producci¨®n de ¨®xido n¨ªtrico (NO) por reacci¨®n de Griess, TGFb por ELISA de captura y la actividad de arginasa mediante la producci¨®n de urea en lisados celulares. Los resultados demuestran que levaduras vivas de C. neoformans y C. gattii suprimen significativamente la producci¨®n de NO por Ma preactivados con LPS (controles: 294¡À 0,4 mM; Cn: 139¡À0,3 mM; Cg: 157¡À1 mM; p < 0,05; control vs Cn o vs Cg). Por el contrario, ambas especies incrementaron la actividad de arginasa de los Ma, pero se observ¨® una actividad enzim¨¢tica mayor en Ma incubados con C. gattii (mgUrea/mg prote¨ªna de control: 0,77¡À0,4; Cn: 0,92¡À0,1; Cg: 1,21¡À0,02; P < 0,05; Cg vs control). De manera similar, C. neoformans y C. gattii estimularon un aumento significativo en la producci¨®n de TGF¦Â por los Ma activados. La modulaci¨®n de NO, arginasa y TGF¦Â no fue inducida por levaduras muertas y fue independiente de la fagocitosis (TGF¦Â [pg/ml] control: 49¡À27; Cn: 119¡À17; Cn opsonizado: 115¡À25; Cn muerto: 62,7¡À11; Cn muerto opsonizado: 32¡À6)  y del bloqueo de receptores que unen el polisac¨¢rido capsular, CD32 y CD18. Estos resultados muestran que C. neoformans y C. gattii pueden modular la activaci¨®n de macr¨®fagos alveolares de una manera que podr¨ªa favorecer su persistencia en el hu¨¦sped infectado.