Efecto de FB1, AFB1 y mezcla de ambas toxinas sobre la fragmentación del ADN y el estado oxidativo de CMB de ratas

CANEPA MC; THEUMER MG; LÓPEZ AG,; RUBINSTEIN HR.

Santa Fe

Congreso; XI CONGRESO Y XXI JORNADAS ARGENTINAS DE MICOLOGÍA; 2008

Asociación Argentina de Micología

Efectos de FB1, AFB1 y mezcla de ambas toxinas sobre la fragmentación del ADN y el estado oxidativo de CMB en ratas. Cánepa, M. C.1; Theumer, M. G. 1; López, A. G.2; Mary, V.S1. & Rubinstein, H. R.1 CIBICI (CONICET), Departamento de Bioquímica Clínica, Facultad de Ciencias Químicas, calle Haya de la Torre esq: Medina Allende TE. 54 351 4344973/6 interno115. Universidad Nacional de Córdoba, Ciudad Universitaria,  Argentina1                         Instituto de Ciencia y Tecnología de los Alimentos, ICTA, Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales, Universidad Nacional de Córdoba2. hectorru@mail.fcq.unc.edu.ar Introducción: Las micotoxinas son compuestos sintetizados durante el metabolismo secundario de hongos filamentosos. Están presentes como contaminantes de cereales y alimentos derivados de estos. El estudio del daño del ADN a nivel cromosomal es una parte esencial de la toxicología genética, uno de los métodos preferidos para valorar el daño genético inducido por distintos compuestos químicos es el ensayo de cometa. Se observó que fumonisina B1 (FB1) indujo fragmentación del ADN nuclear en fibroblastos humanos en ausencia de citotoxicidad evidente, lo que lleva a considerar que podría existir al menos un mecanismo no descripto aún, para el efecto genotóxico esta micotoxina . Para aflatoxina B1 (AFB1) ha sido descripto un efecto genotóxico, provocando cambios hereditarios que pueden conducir a la célula a una transformación maligna. En los últimos años ha cobrado importancia el ensayo del cometa o electroforesis de células individuales para evaluar el grado de daño a nivel de ADN. Dado que FB1 produce disrupción del metabolismo de los esfingolípidos, ha sido descripto que su efecto genotóxico podría deberse a la peroxidación lipídica (Domijan, 2007).  Objetivo/s: Conocer los mecanismos involucrados en la genotoxicidad presentada por las micotoxinas en modelos experimentales in vivo por medio de la administración oral de las mismas y en forma subcrónica a ratas. Materiales y Métodos: Esquema experimental in vivo: Intoxicación subcrónica (90 días) con las siguientes alimentos: Dieta control, dieta con 40 ppb de AFB1, dieta con 100 ppm de FB1,  dieta con 40 ppb de AFB1+ 100 ppm de FB1. Al final del esquema de intoxicación, los animales se sacrificarán y se obtendrán las muestras biológicas. Ensayo del Cometa: las células obtenidas serán mezcladas con agarosa de bajo punto de fusión y  sembradas sobre un gel de agarosa de punto de fusión normal, para ser sometidas a un campo eléctrico suave (250 mV, 30 minutos) y luego serán coloreadas con bromuro de etidio para ser analizadas bajo el microscopio de fluorescencia. (Singh et al 1998) Determinación de enzimas antioxidantes catalasa (CAT) y superóxido dismutasa (SOD) mediante técnicas espectrofotométricas. Resultados: Se observó que el mayor daño (daño 4) fue producido por AFB1, mientras que el tratamiento con FB1 aunque el daño que produjo fue significativamente menor. La mezcla se comportó de manera diferente a los dos tratamientos individuales manifestando un nivel intermedio entre AFB1 Y FB1. Las enzimas si bien incrementaron su actividad con el control, demostraron que la célula se encuentra en estado de estrés oxidativo cuando son sometidas a la acción de las toxinas. Conclusiones: El cambio en la actividad de las enzimas antioxidantes muestra a la célula en estrés oxidativo que podría ser responsable del daño a nivel del ADN. FB1 demostró ser genotóxica, además el tratamiento mezcla no mostró efecto sumatorio de ambas toxinas. Referencias Bibliográficas. -Domijan, A. M.; Davor, Z.; Milié, M. and Maja, P. Fumonisin B1: Oxidative status and DNA damage in rats. Toxicology (2007) -Singh, N.P., McCoy, M.T., Tice, R.R., Schneider, E.L., 1988. Exp.Cell Res. 175, 184–191.