Glucuronoxilomanano de Cryptococcus neoformans induce apoptosis de macrófagos mediada por óxido nítrico vía señalización de CD18 - Proteína Kinasa C.

LS CHIAPELLO, JL BARONETTI, AP GARRO, F SPESSO, DT MASIH

Mar del Plata

Jornada; LII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica, LV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2007

Sociedad Argentina de Inmunología, Sociedad Argentina de Fisiología

Glucuronoxilomanano de Cryptococcus neoformans induce apoptosis de macrófagos  mediada por óxido nítrico vía señalización de CD18 - Proteína Kinasa C LS Chiapello, JL Baronetti, AP Garro, F Spesso, DT MasihCIBICI-CONICET, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba.   Glucuronoxilomanano (GXM) es el polisacárido mayoritario de la cápsula del hongo levaduriforme Cryptococcus neoformans. Previamente demostramos que GXM induce apoptosis de macrófagos mediada por óxido nítrico (NO). El objetivo de este trabajo fue identificar los receptores y vías de señalización de los macrófagos (Mac) involucrados en la producción de NO y apoptosis inducida por GXM, e investigar si este fenómeno ocurre in vivo.Glucuronoxilomanano se obtuvo por precipitación con etanol y CTAB a partir de un cultivo de levaduras. Se utilizaron ratas Wistar y los Mac se purificaron de lavados peritoneales, por gradiente de percoll y adherencia. Los Mac se cultivaron con 250 μg de GXM o GXM marcado con FITC (GXM-FITC), en ausencia o presencia de anticuerpos bloqueantes de CD11b/c, FCγRII o CD18; e inhibidores de receptores de manosa, betaglucanos, proteína kinasa C (PKC), tirosina kinasas y MAP kinasas . Luego de 24 o 48 h de cultivo se determinó la endocitosis de GXM-FITC por citometría de flujo (CF), la concentración de nitritos por la reacción de Griess y la apoptosis por tinción con ioduro de propidio y CF . Los resultados demuestran que el bloqueo de CD18, FCγRII, CD11b/c y PKC inhibe la captación de GXM por los Mac (P < 0,05; IFM de GXM-FITC de Mac + inhibidores versus IFM de GXM-FITC de Mac solos), sin embargo sólo el bloqueo de CD18 y PKC suprime la producción de NO y la apoptosis inducidas por GXM. (p < 0,05; Mac + GXM + inhibidores vs Mac + GXM) Por otra parte, se determinó la producción de NO in vivo en macrófagos de ratas inoculadas  vía i.p. con solución fisiológica (SF), GXM (5 mg) o LPS (500 μg) por 14 horas. Los resultados muestran que Mac de ratas inoculadas con GXM producen mayores niveles de NO que los Mac de ratas inyectadas con SF (p < 0,03) y este fenómeno depende de la activación de PKC. Este estudio demuestra una nueva vía de señalización mediante la cual el polisacárido capsular de C. neoformans induce NO y muerte de macrófagos.