Participación de peróxido de hidrógeno en la despolarización mitocondrial (m) y apoptosis de eosinófilos (Eo) inducida por productos excretores-secretores (PES) de Fasciola hepatica.

SERRADELL, MARIANELA C; GUASCONI, LORENA; MASIH, DIANA T

Chascomús, Buenos Aires, Argentina.

Congreso; XXII Reunión de la Sociedad Argentina de Protozoología.; 2007

Sociedad Argentina de Protozoología (SAP)

Hemos demostrado que PES de F. hepatica inducen apoptosis de Eo con activación de caspasas e injuria mitocondrial. Teniendo en cuenta que dentro de los diversos estímulos capaces de mediar ¯Dym se encuentran derivados tóxicos de oxígeno (DTO), se decidió investigar su participación, evaluando el rol de dos importantes sitios productores de DTO, el complejo NADPHoxidasa y la mitocondria. Eo peritoneales de ratas Wistar se purificaron mediante gradiente con Percoll y se incubaron en medio solo, con 80 mg/ml de PES o con dexametasona (control de apoptosis) a 37 ºC y 5% de CO2. Luego de 6 hs, la apoptosis se evaluó por citometría en células fijadas y teñidas con ioduro de propidio. El potencial de membrana mitocondrial se determinó luego de 3 hs de cultivo por citometría en células no fijadas teñidas con el colorante lipofílico TMRE. Los niveles de DTO se determinaron en cultivos de 1 h por quimioluminiscencia. Los PES aumentaron significativamente la producción de DTO. La preincubación con DPI y rotenona, inhibidor de NADPH y mitocondria, respectivamente, disminuyó la producción de DTO, la ¯Dym y la apoptosis inducida por los PES. Como posibles DTO involucrados, se determinaron los niveles de O2- y H2O2 detectándose solo un aumento en los niveles de H2O2. Por otra parte, catalasa pero no superóxido dismutasa inhibió tanto la ¯Dym como la muerte inducida por los PES, corroborando el importante rol del H2O2. Los datos demuestran que PES liberados por F. hepatica inducen en Eo un incremento temprano en la producción de DTO que precede a la injuria mitocondrial, con NADPHoxidasa y mitocondria como principales sitios productores de DTO y con H2O2 como mediador clave del fenómeno de apoptosis.