Transporte y Metabolismo de Hormonas Tiroideas en Células Dendríticas: expresión de genes involucrados

GIGENA N; ALAMINO VA; MONTESINOS MM; NAZAR M; MASINI-REPISO AM; PELLIZAS CG

Córdoba

Congreso; X Congreso de la Federación Argentina de Sociedades de Endocrinología y Metabolismo; 2014

Federación Argentina de Sociedades de Endocrinología y Metabolismo

Introducción y Objetivos: Las células dendríticas (DC) son células presentadoras de antígeno especializadas que reconocen, procesan y presentan antígenos a linfocitos T (Li T) vírgenes para inducir respuestas inmunes adaptativas. Los efectos de las hormonas tiroideas (HT) en el sistema inmune han sido estudiados, pero fundamentalmente sobre las células B y T. En nuestro laboratorio demostramos que DC murinas expresan el receptor de HT1 (TRβ1) y que niveles fisiológicos de la HT tiroidea activa: triiodotironina (T3) estimulan su maduración y potencian su capacidad de estimular una respuesta tipo Th1 (Mascanfroni y col. FASEB J 2008; 22: 1032) a través de un mecanismo Akt, NF-kB y TR1 dependiente (Mascanfroni y col., J Biol Chem 2010; 285: 9569) que es contrarrestado por glucocorticoides (Montesinos y col., Steroids 2012; 77: 67). Por su parte, las acciones de las HT en sus tejidos blanco son influenciadas por varios factores, como su transporte a través de la membrana plasmática y el control de sus niveles intracelulares mediado por deiodasas de iodotironinas (Ds), eventos aún desconocidos a este nivel. Los objetivos del trabajo fueron: 1) Evaluar el transporte de HT en DC, analizando a) la expresión de los 5 principales transportadores (Transportador de Monocarboxilatos (MCT) Tipo 8 y 10; Polipéptido Transportador de Aniones Orgánicos (OATP) Tipo 1C1, Transportador de Aminoácidos Neutros (LAT) Tipo 1 y 2) y b) la capacidad de la DC de transportar HT. 2) Analizar la expresión y actividad de las 3 Ds en DC (D1, 2 y 3). 3) Evaluar una potencial regulación del transporte y metabolismo de HT por acción de T3. Materiales y Métodos: DC inmaduras (DCi) fueron obtenidas de progenitores de médula ósea de ratones C57BL/6 y cultivadas en RPMI 1640 con suero fetal bovino (10%) y factor estimulante de colonias macrocíticas-granulocíticas (GM-CSF). Las DCi fueron maduradas con T3 (10 nM) o LPS (100 ng/ml, control positivo) durante 18 hs. La presencia y los niveles de RNAm de los genes de interés fueron evaluados semi-cuantitativamente por RT-PCR convencional y cuantitativamente por RT-PCR en tiempo real (qRT-PCR, SYBR GREEN) La identidad de los genes se confirmó por secuenciamiento. La evaluación de las proteínas respectivas se realizó mediante Western Blot e Inmunofluorescencia, u. La actividad enzimática de las Ds así como la determinación del transporte de HT fue llevado a cabo mediante técnicas radioisotópicas utilizando 125I-T4. Resultados: 1) DC expresan solo 2 transportadores de HT: MCT-10 y LAT-2, a nivel de RNAm y proteína. 2) Se evidenció la presencia de RNAm y proteína tanto de D2 como de D3 en DCi, no así de D1. 3) A. Niveles fisiológicos de T3 regulan la expresión de MCT-10 y LAT-2 incrementando los niveles de RNAm y proteína. B. DC tratadas con T3 incrementan el transporte de HT al interior celular. C. El tratamiento de DC con T3 incrementa los niveles de RNAm y Proteína de Dio3; no así los niveles de Dio2. D. La actividad enzimática de Dio3 se ve aumentada en DC tratadas con T3 mientras que la actividad de Dio2 permanece inalterada. Discusión y Conclusiones: Los efectos de T3 sobre la maduración y la función de las DC y la inducción de la inmunidad adaptativa fueron oportunamente reportados por nuestro laboratorio. Pero cómo T3 ingresa a la DC y la forma en la que sus niveles intracelulares son controlados, aún no habían sido explorados. En este trabajo caracterizamos los transportadores involucrados en el ingreso de HT al interior celular en DC y su regulación mediada por T3. Por su parte, observamos expresión de D2 y D3 en DCi. El incremento de la actividad de D3 en DC tratadas con T3 sugiere un rol inactivante de dicha D, ejerciendo un mecanismo de restauración de los niveles normales de T3 en el interior de las DC. Nuestros hallazgos proveen por primera vezla caracterización de los eventos moleculares involucrados en el transporte y metabolismo de las HT en DC, fenómenos críticos para un adecuado mecanismo de acción de estas hormonas en el proceso de inicio de la respuesta inmune