PROMOCIÓN DE LA ACTIVIDAD DE METALOPROTEINASAS (MMPS) INDUCIDA POR LA INTERACCIÓN CÉLULA TUMORAL TIROIDEA-FIBROBLASTOS.

DELLA VEDOVA AB; NAZAR M; MASINI-REPISO AM; PELLIZAS CG; DONADIO AC

Córdoba

Congreso; X Congreso FASEN; 2014

Federación Argentina de Sociedades de Endocrinología

La célula tumoral así como la célula epitelial normal, conviven en microambientes complejos incluyendo la matriz extracelular y componentes celulares tales como fibroblastos (Fb), células endoteliales y células del sistema inmune entre otras, conocidas colectivamente como células estromales. Este microambiente tumoral es un componente activo y dinámico, cumpliendo funciones críticas en la sobrevida, proliferación y migración de la célula tumoral [1]. En un modelo experimental de tumor tiroideo se describió la importancia de los Fb en la promoción del desarrollo tumoral [2]. Sin embargo, el rol de la interacción célula tumoral-Fb en procesos invasivos tiroideos no ha sido completamente caracterizada. Células tumorales, así como células no neoplásicas, sintetizan enzimas como las metaloproteinasas (MMPs), consideradas uno de los reguladores del microambiente tumoral. En estudios preliminares evidenciamos que la interacción célula tumoral tiroidea-Fb induce la secreción y activación de MMPs, especialmente MMP2, en sobrenadantes de cultivo (MCs) así como de factores solubles promotores de la migración celular. Entre las proteínas involucradas en la síntesis y activación de MMPs podemos mencionar a CD147, a MT1-MMP y al inhibidor específico de MMPs tipo 2 (TIMP2), éstas dos últimas especialmente vinculadas a la activación de MMP2 [3]. Objetivo: Analizar la expresión de proteínas asociadas a la inducción y activación de MMPs en Fb, células tumorales y no tumorales tiroideas y su modulación por el co-cultivo célula tiroidea-Fb. Materiales y Métodos: Líneas celulares tiroideas humanas de carcinoma papilar (TPC-1), carcinoma anaplásico (8505c) y células no-tumorales (N-ThyOri) se cultivan en presencia (co-cultivos) o ausencia de Fb normales. La determinación de la actividad de MMPs en MCs se realizó mediante zimografías. La expresión de ARNm de TIMP-2 y MT1-MMP se analizó mediante RTq-PCR. La expresión y perfiles de glicosilación de la proteína CD147 fue analizada por ensayos de inmunoprecipitación y western blot. Resultados: El co-cultivo de células TPC-1 y 8505c con Fb evidenció un aumento significativo de la expresión y actividad de MMP2 en MCs (p≤0,05 ANOVA, Student Newman Keuls). Estos hallazgos no se observaron al utilizar células N-ThyOri en los co-cultivos. La utilización de transwells para la realización de los co-cultivos permitió asociar los principales cambios en la expresión de MMPs a la población de Fb. La expresión de CD147 en Fb co-cultivados con células TPC-1 y 8505c incrementó en relación a los niveles observados en Fb cultivados en forma aislada, además no se observaron cambios en el perfil de glicosilación de CD147 en las condiciones ensayadas. La expresión de MT1-MMP mostró valores superiores en Fb co-cultivados con células 8505c en relación a lo observado en los co-cultivos con células N-ThyOri. Sin embargo, la expresión de TIMP2 tuvo una tendencia inversa, siendo mayor su expresión en Fb co-cultivados con células N-ThyOri en relación a los valores obtenidos con células 8505c. No se evidenció amplificación de MT1-MMP en Fb cultivados con células TPC-1. No se observaron cambios significativos en la expresión del ARNm de estos genes en células tumorales cultivadas en forma aislada o co-cultivadas. Conclusiones: Nuestros estudios evidenciaron una modulación a nivel de Fb de proteínas involucradas con la expresión y activación de MMPs, como CD147, MT1-MMP y TIMP-2, inducidas por la interacción célula tumoral-Fb. Ésta modulación estaría en concordancia con los cambios observados en el perfil de MMPs secretadas.