CIBICI   14215
CENTRO DE INVESTIGACION EN BIOQUIMICA CLINICA E INMUNOLOGIA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización de los procesos de transporte y metabolismo de hormonas tiroideas en células dendríticas
Autor/es:
GIGENA N; ALAMINO VA; MONTESINOS, MM; NAZAR, M; MASINI-REPISO AM; CREMASCHI, G; PELLIZAS CG
Lugar:
Córdoba
Reunión:
Congreso; X Congreso Federación Argentina de Sociedades de Endocrinología (FASEN); 2014
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Endocrinología y Metabolismo y Federación Argentina de Sociedades de Endocrinología
Resumen:
Introducción y Objetivos: Las células dendríticas (DC) son células presentadoras de antígeno especializadas que reconocen, procesan y presentan antígenos a linfocitos T (Li T) vírgenes para inducir respuestas inmunes adaptativas. Previamente demostramos que DC murinas expresan el receptor de hormonas tiroideas (HT) 1: TRβ1 y que niveles fisiológicos de la HT activa: triiodotironina (T3) estimulan su maduración y potencian su capacidad de estimular una respuesta tipo Th1 [1] a través de un mecanismo Akt, NF-kB y TR1 dependiente [2] que es contrarrestado por glucocorticoides [3]. Por su parte, los efectos de las HT en sus tejidos blanco son influenciados por varios factores, como su entrada a la célula a través de la membrana plasmática (transporte) y el control de sus niveles intracelulares mediado por deiodasas de iodotironinas (Ds), eventos desconocidos a nivel de DC y fundamentales para un adecuado mecanismo de acción de estas hormonas. Los objetivos del trabajo fueron evaluar a nivel de DC: 1) El transporte de HT analizando: a) la expresión de los 5 principales transportadores de HT (Transportador de Monocarboxilatos (MCT) Tipo 8 y 10; Polipéptido Transportador de Aniones Orgánicos (OATP) Tipo 1C1, Transportador de Aminoácidos Neutros (LAT) Tipo 1 y 2) y b) la capacidad de DC de transportar HT; 2) La expresión y actividad de las 3 Ds en DC (D1, 2 y 3); y 3) La potencial regulación del transporte y metabolismo de HT por T3. Materiales y Métodos: DC inmaduras (DCi) fueron obtenidas de progenitores de médula ósea de ratones C57BL/6 y cultivadas en RPMI 1640/suero fetal bovino 10% y factor estimulante de colonias macrocíticas-granulocíticas. Las DCi fueron maduradas con T3 (10 nM) o LPS (100 ng/ml, control positivo) durante 18 hs. La presencia y los niveles de RNAm de los genes de interés fueron evaluados semi-cuantitativamente por RT-PCR convencional y cuantitativamente por RT-PCR en tiempo real (qRT-PCR, SYBR GREEN). La identidad de los genes se confirmó por secuenciamiento. La evaluación de las proteínas respectivas se realizó por Western Blot y/o Inmunofluorescencia. La actividad enzimática de las Ds y la determinación del transporte de HT fue evaluado mediante técnicas radioisotópicas usando 125I-T4. Resultados: 1) DC expresan mRNA y proteína de 2 transportadores de HT: MCT-10 y LAT-2. 2) Se evidenció RNAm y proteína tanto de D2 como de D3 en DC, no de D1. 3) El tratamiento de DC con niveles fisiológicos de T3: A. regulan la expresión de MCT-10 y LAT-2 aumentando los niveles de RNAm y proteína; B. incrementa el transporte de HT al interior celular; C. aumenta los niveles de RNAm y Proteína de Dio3; no los niveles de Dio2; D: la actividad enzimática de Dio3 se vió aumentada mientras que la actividad de Dio2 permaneció inalterada. Discusión y Conclusiones: Los efectos de T3 sobre la maduración y la función de las DC y la inducción de la inmunidad adaptativa fueron oportunamente reportados por nuestro laboratorio. Pero cómo T3 ingresa a la DC y la forma en la que sus niveles intracelulares son controlados, fueron caracterizados en este trabajo. Reportamos la expresión de los transportadores involucrados en el ingreso de HT al interior celular y su regulación mediada por T3. Además, observamos expresión de D2 y D3 en DC. Por su parte, el incremento observado en la actividad de D3 en DC tratadas con T3 sugiere un rol inactivante de la HT, ejerciendo un mecanismo de retroalimentación negativa. Nuestros hallazgos proveen por primera vez la caracterización de los eventos moleculares involucrados en los procesos de Transporte y Metabolismo de las HT en DC, críticos en el mecanismo de acción de estas hormonas en el proceso de inicio de la respuesta inmune. Bibliografía: [1] Mascanfroni y col. FASEB J 2008; 22: 1032. [2] Mascanfroni y col., J Biol Chem 2010; 285: 9569. [3] Montesinos y col., Steroids 2012; 77: 67.