Participacion de mecanismos de autofagia en las retinopatias isquemicas de la retina

SUBIRADA, P; JALDIN FINCATI, J; LORENC,M VE; PAZ, MC; SANCHEZ, MC

Buenos Aires

Congreso; X Congreso Nacional de Investigacion en Vision yn Oftalmologia; 2014

Asociacion de Investigacion en Vision y Oftalmologia

Objetivos: Las retinopatías proliferativas son causa frecuente de ceguera irreversible siendo la hipoxia el principal responsable de las alteraciones vasculares y degeneración neuronal. Actualmente, el concepto de autofagia como mecanismo de defensa ha cobrado relevancia en estas enfermedades dado que es un proceso rápidamente activado bajo condiciones de hipoxia. Por lo cual, el objetivo de este trabajo fue evaluar los efectos de hipoxia sobre la activación de autofagia en modelos retinales Métodos: Se utilizaron modelos experimentales in vitro e in vivo, los cuales consistieron en una línea inmortalizada de células gliales de Müller (CM), MIO-M1, así como retinas de ratones obtenidas del modelo de retinopatía inducida por oxigeno (OIR). Para los ensayos de hipoxia las células fueron cultivadas hasta una confluencia entre 50-60% y luego sometidas a condiciones de hipoxia, 0,3 % O2, 4 hs, en una incubadora diseñada para tal fin. Como control positivo se utilizaron células sometidas a cinética de ayuno en un medio mínimo, mientras que como control negativo utilizamos CM cultivadas en normoxia (21% de O2). Los lisados celulares fueron evaluados para expresión de diferentes proteínas de autofagia mediante técnicas de Western blot. Por otra parte las retinas de ratones del modelo OIR así como sus respectivos controles de aire fueron analizadas en el día posnatal P12 (fase de hiperoxia) y P17 (fase de hipoxia)  por inmunofluorescencia para el marcador de autofagia LC3 así como para diferentes marcadores celulares y posteriormente analizadas por Microscopia Confocal FV300 (Olimpus).   Resultados: La CM cultivadas durante 4 hs en hipoxia mostraron una acumulación de la proteína LC3 en los lisados totales. A su vez, las células MIO-M1 cultivadas en medio mínimo (condiciones de ayuno) mostraron vesículas positivas para LC3 proporcional al tiempo de ayuno. En el modelo in vivo observamos que retinas provenientes del modelo OIR presentaron vesículas LC3 positivas compatibles con autofagosomas a nivel de la capa nuclear interna (CM) y de células ganglionares, respecto a animales control.   Conclusiones: Estos resultados demuestran que ante condiciones de hipoxia y ante la falta de nutrientes, las CM son capaces de sensar rápidamente los cambios ambientales promoviendo un incremento en el flujo autofágico.