Evaluación de la eficacia in vitro del complejo iónico Hialuronano-Doxorrubicina frente a cultivos de células tumorales.

BATTISTINI F; FLORES MARTIN J; OLIVERA MV; GENTI RAIMONDI S; MANZO RH

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)-Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS) - XLV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental (SAFE).; 2013

SAIC, SAFIS y SAFE

El Hialuronano (Hi) es un polímero natural constituido por unidades repetidas del N-acetil D-glucosamina y el ácido glucurónico. Es un polímero ampliamente estudiado en el campo de la farmacia y de la tecnología farmacéutica debido a carácter atoxicico, no inmunogénico y no inflamatorio, como también su capacidad mucoadhesiva y de biodegradación. Estas propiedades constituyen a Hi en un interesante candidato como portador de fármacos (F) de interés terapéutico. Estudios previos en nuestro grupo de investigación demostraron que F modelo conteniendo grupos básicos en su estructura, acomplejados con los grupos carboxílicos del Hi (Hi-F), se liberan lentamente a través de sistemas limitados por una membrana semipermeable cuando se utiliza agua como medio receptor. El reemplazo de éste por solución de NaCl aumenta la velocidad de liberación del F por un mecanismo de intercambio iónico, evidenciando la capacidad portadora del Hi. Es conocido que los receptores de membrana del Hi, denominados CD44, se encuentran sobre-expresados en células cancerígenas, no así en líneas celulares normales. Nuestra hipótesis sostiene que esta sobreexpresión de los receptores de membrana serian de utilidad en una primera instancia para llevar a cabo una liberación sitio especifica de la Dx al tumor. Asimismo, al interaccionar los CD44 con Hi se produciría una endocitosis del complejo, y por ende un mayor ingreso de Dx al interior de la célula. Todo esto nos llevó a diseñar un estudio comparativo in vitro entre Hi-Dx y Dx. En el actual estudio se evaluó el complejo iónico Hialuronano-Doxorrubicina (Hi-Dx) como sistema portador de F para el tratamiento antineoplásico. La reacción entre los grupos ácidos de Hi y los básicos de Dx.HCl produce una elevada condensación iónica (>95%), generando un complejo portador soluble tanto cuando se utiliza la sal HiNa como el ácido HiH. Se determinó la actividad antineoplásica de Hi-Dx frente a un cultivo de células de cáncer pulmonar (A549) y células de placenta del tercer trimestre como modelo de célula no tumoral (HTR8 svneo) mediante el ensayo colorimétrico de viabilidad celular (MTT), microscopia de fluorescencia y citometría de flujo, utilizando como referencia Dx en concentraciones equivalentes. Para el ensayo de viabilidad celular, cuando se representa el porcentaje de células vivas en función del tiempo se obtiene un perfil, cuyo area sobre la curva (AOC) nos estaría dando una idea de la eficacia del sistema. El AOC obtenida en el ensayo MTT fue 3 veces mayor para el complejo Hi-Dx que para la solución de Dx en las células A549, mientras que para las células HTR8 svneo no hay una diferencia en las aéreas entre el complejo Hi-Dx y la Dx. La microscopia de fluorescencia y la citometría de flujo estuvieron en línea con estos resultados y demostraron que existe una mayor concentración de Dx intracelular cuando el mismo se encuentra acomplejado en aquellas células que sobre expresan CD44. Esto sustentaría nuestra hipótesis que la presencia de los receptores de membrana en las células tumorales específicos para Hi estarían de alguna manera promoviendo el ingreso de la Dx al interior de la célula con una consecuente mayor eficacia del complejo Hi-Dx respecto a la solución de Dx de referencia. Estos estudios demuestran por primera vez la potencialidad que tiene el Hi como sistema portador de F anticancerígenos, y la mayor eficacia y especificidad que tiene el sistema portador por sobre la solución de Dx de referencia sobre las células tumorales. Estos resultados sientan las bases para el desarrollo de nuevas terapias antineoplásicas potencialmente más efectivas.