Análisis cuantitativo de la co-localización de Rab1b con sus efectores de la vía secretora.

HERNÁN MARTINEZ; GARCIA IA; SAMPIERI, L; ALVAREZ, C

La Falda

Congreso; XIX Jornadas científicas de la Sociedad de Biología de Córdoba.; 2013

Sociedad de Biología de Cba

ANÁLISIS CUANTITATIVO DE LA CO-LOCALIZACIÓN DE RAB1B CON SUS EFECTORES DE LA VÍA SECRETORA Martinez H.E., García I.A., Sampieri L. and Alvarez C.I. Facultad de Ciencias Químicas. UNC. Dpto. Bioquímica Clínica. CIBICI-CONICET. La GTPasa Rab1b participa en el transporte anterógrado de proteínas y lípidos en la vía secretora mediante la interacción con múltiples proteínas (efectores) localizadas en diferentes estructuras que la componen. Algunos de estos efectores y su localización son: 1) proteínas del complejo COPII, en sitios de salida del Retículo Endoplásmico (ERES); 2) proteínas relacionadas a COPI, en estructuras túbulo-vesiculares (VTCs), y 3) factores de anclaje o ?tethering?, como p115 y GM130, en VTCs y cis-Golgi, respectivamente. Aunque estas interacciones han sido bien caracterizadas, se desconoce la relación espacio/temporal de las mismas y su dinámica durante el transporte anterógrado del cargo. En este trabajo analizamos cuali y cuantitativamente, mediante microscopía confocal, la co-localización de Rab1b con sus efectores localizados en estructuras COPII, VTCs y Golgi en dos situaciones: 1) En estado estacionario o de equilibrio entre transporte anterógrado y retrógrado; y 2) cuando el cargo está acumulado en el RE por el efecto de Brefeldina A (BFA). Para verificar la validez de las cuantificaciones, se evaluó la co-localización de proteínas de ubicación conocida. Los resultados indican que: -la estrategia empleada para la cuantificación es válida; -la co-localización de Rab1b con efectores localizados en COPII y VTCs incrementa entre dos a tres veces cuando se utiliza BFA. Ensayos de time-lapse indican que Rab1b co-localiza transitoriamente con estructuras COPII, las cuales presentan mayor estabilidad que Rab1b a lo largo del tiempo