El Proceso de Forforilacion Regula el Rol Biologico de ZEB1

PERRONE A; LLORENS DE LOS RIOS C; CABANILLAS A

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunion Cientifica Anual Sociedad Argentina de Investigacion Clinica (SAIC).; 2013

SAIC

ZEB1 es un factor de transcripción importante para el desarrollo normal celular y el cáncer, especialmente en la transición epitelio-mesenquimatosa (EMT) que inicia el proceso de metástasis. ZEB1 se encuentra diferencialmente fosforilada en distintos tipos celulares, pero aun el rol de la fosforilación es desconocido. Estudios previos de gen reportador y EMSA nos permitieron demostrar que una menor fosforilación de ZEB1 incrementa su unión a DNA y la represión transcripcional de sus genes blanco y que su dominio carboxi terminal ZD2 contiene 4 fosfositios claves (T851, S852, S853, T867).  El análisis funcional de mutantes en ZD2 mostro que la activación de PKC o ERK (a través de IGF-1) previene la represión transcripcional por ZD2. Además, clones GFP-ZD2 muestran que IGF-1 es suficiente para alterar la localización nuclear de ZD2. Nuestro interés fue expandir el significado de la fosforilación de ZEB1 a toda la proteina. ZEB1 mutado en los cuatro sitios mencionados reprimió mas la actividad de genes blanco que wtZEB1. Curiosamente, la represión inducida por la mutación simple T867A fue similar a la de wtZEB1 sugiriendo que los cuatro sitios son necesarios para inducir el efecto y que habría una activación cooperativa de los mismos. Inmunofluorescencias de células CHO transfectadas con ZEB1-T867A o ZEB1-T851A/S852A/S853A/T867A mostraron que las mutantes fueron no respondedoras a IGF-1 (permanecieron nucleares). Ensayos de genes reporteros con mutantes (m) mZD2-T867A, mZD2-T867E (fosfomimetica) y mZEB1-T867A mostraron que IGF-1 indujo su efecto a través de T867 y que ZEB1 tiene otros sitios potencialmente respondedores a IGF-1.   Los resultados confirman la dependencia del rol biológico de ZEB1 con su estado de fosforilación, y también soporta la hipótesis de una activación cooperativa de las vías de PKC y MAPK sobre los fosfositios identificados.   La regulación de ZEB1 por quinasas permitiría a ZEB1 servir como factor integrador de señales externas.