Regulacion de ZEB1 por Notch1 en Leucemia Linfática Aguda T

CAVALLO N; LLORENS DE LOS RIOS C; PERRONE A; CABANILLAS A

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunion Cientifica Anual Sociedad Argentina de Investigacion Clinica (SAIC).; 2013

SAIC

ZEB1 (Zinc Finger E-box Binding Homeobox) es un factor de transcripción (FT) involucrado en la diferenciación de células derivadas de mesodermo y en la Transición Epitelio-Mesenquimática (EMT), proceso relacionado a la metástasis de tumores sólidos. Recientemente se asoció ZEB1 a patologías hematológicas de linfocitos T (LiT), pero su función aun no ha sido bien caracterizada. En el proceso de EMT se ha asociado a ZEB1 con la vía de señalamiento de Notch1. Notch1  tiene un rol crítico en el desarrollo normal de LiT y también en Leucemia Linfática Aguda T (LLA-T). Más del 50% de los pacientes con LLA-T presentan mutaciones activantes de Notch1. Nuestro objetivo fue evaluar si existe una correlación entre ambos factores en leucemias. Para ello se evaluó la expresión proteica basal de ZEB1 y Notch1 por western blot en diferentes líneas celulares humanas de leucemia aguda y se determinó que la línea celular de LLA-T (Jurkat) presenta mayor expresión de ambos factores comparado con las líneas celulares mieloides. Para evaluar si hay dependencia funcional entre ZEB1 y Notch1 en LLA-T se inhibió la vía Notch1 en células Jurkat, usando un inhibidor de gamma secretasa (GSI) por 3 y 8 días y se evidenció una disminución en la expresión de ZEB1 del 50% al 8º día. GSI también produjo disminución de la expresión de Akt fosforilado. Para evaluar si la vía de PI3K es intermediaria de la acción de Notch1 sobre ZEB1, se incubaron células Jurkat con el inhibidor de PI3K, LY294002 y se observo disminución en ZEB1 sin modificar Notch1. Además, se evaluó la acción de Notch1 sobre el promotor de ZEB1 por ensayos de genes reportadores en HEK293T con un vector que expresa la porción activa de Notch1 (EF.hICN1.CMV.GFP) y el promotor de ZEB1 (Z1p1000Luc). Notch1 produjo un aumento de la actividad del promotor de ZEB1, lo cual se revirtió al inhibir la vía de PI3K. Por lo tanto se concluye que Notch1 regularía a ZEB1 en LLA-T y este efecto sería mediado por PI3K.