Participación de las Vías de Señalización en la Fosforilación del Dominio Amino Terminal de ZEB1y su Localización Subcelular

LLORENS DE LOS RIOS C; CAVALLO N; PERRONE A; CABANILLAS A

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunion Cientifica Anual Sociedad Argentina de Investigacion Clinica (SAIC).; 2013

SAIC

ZEB1 (Zinc Finger E-box binding Homeobox) factor de transcripción involucrado en la diferenciación celular, EMT y metástasis se presenta bajo dos formas hiper e hipofosforiladas. Nuestro objetivo fue determinar qué vía/s de señalización intracelular estarían involucradas en la fosforilación de la región aminoterminal de ZEB1 (N-ZEB1) y cómo eso repercute en su localización subcelular. Se realizaron ensayos de inmunoprecipitación de N-ZEB1 en células HEK293T previamente tranfectadas con un clon que expresa dicha región y posterior Western Blot revelado con diferentes anticuerpos anti-fosfosustrato específicos, lo cual mostró que N-ZEB1 es modificado postraduccionalmente por fosforilación y las vías de señalización involucradas serían PI3K(AKT), MAPK y PKC. Para estudiar la localización subcelular de N-ZEB1 se realizó microscopia de fluorescencia en células CHO-K1 tranfectadas con dos clones de dicha región fusionados a GFP, eGFPZ1 y eGFPZ2 (incluido en el anterior) y posteriormente tratadas con diferentes activadores e inhibidores de vías. Los tratamientos con PD98095, CalC, LY294002 y NVP-AEW541 (inhibidores de MEK/ERK,  PKC, PI3K e IGF1 respectivamente) mantuvieron la señal GFP con localización nuclear tanto en controles como en ambos clones. El tratamiento con PMA/Iomicina (activador de PKC) reveló una fuerte señal citosólica en ambos clones, en tanto que el tratamiento con IGF1 repitió ese comportamiento sólo en el clon eGFPZ1. El clon eGFPZ2 no fue respondedor a IGF-1. Estos resultados sugieren que el cambio de estado de fosforilación de la región N-ZEB1 induce cambios en su localización subcelular y que las vías de señalización involucradas serían PKC e IGF1 en eGFPZ1 y PKC en eGFPZ2. Múltiples vías se señalización parecen estar involucradas en la fosforilación de N-ZEB1, sin embargo la fosforilación inducida por las vías de IGF1 y PKC contribuirían en el rol biológico de ZEB1 mediante un cambio de localización subcelular.