Terapia Fotodinamica: Estudios de Genotoxicidad del Fotosensibilizador Tris 1,10- Fenantrolina Cromo (III) en la linea celular CHO-K1

GARCIA P; ARGUELLO, GERARDO; VIRGOLINI, MIRIAM; CABANILLAS, ANA MARIA

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunion Cientifica Anual Sociedad Argentina de Investigacion Clinica (SAIC).; 2013

SAIC

Los complejos fenantrolínicos de Cromo (III) se han estudiado como posibles fotosensibilizadores para terapia fotodinámica (PDT). Las propiedades fotoquímicas y fotofísicas de estos complejos, además de su posible capacidad de ingresar al interior de la célula para realizar dicho efecto los hacen compuestos importantes a ser estudiados. Resultados previos de nuestro grupo de investigación, han demostrado la capacidad de los complejos de cromo (III) de unirse a ADN plasmídico y generar daños sólo en presencia de irradiación con luz visible (452nm).  Por otro lado, los resultados preliminares han demostrado que el estado excitado del complejo Tris 1,10-fenantrolina cromo (III)  (Cr(phen)33+) genera una considerable disminución de la viabilidad celular de las células CHO-K1. Es además de suma importancia para la aplicación clínica de la PDT que el fotosensibilizador en su estado fundamental (no excitado) no induzca daño per se sobre las células. El objetivo del trabajo es estudiar la genotoxicidad del Cr(phen)33+ en la línea celular epitelial normal CHO-K1. Para ello, optimizamos en el laboratorio el ensayo de Cometa en el cual es posible medir el porcentaje de ADN degradado luego de ser sometido a electroforesis en condiciones fuertemente alcalinas. En caso positivo se observa al microscopio de fluorescencia al ADN nuclear fragmentado con forma de cometa. Los controles positivos se realizaron utilizando H2O2 a una concentración de 200 µM, en tanto que las células sin tratamiento fueron los  controles negativos. Los resultados muestran que a concentraciones inferiores a 50 µM de Cr(phen)33+ , las cuales normalmente indujeron foto daño a las células, el ADN nuclear se mantuvo intacto, lo que indica que este complejo de cromo podría no ser genotóxico en estas concentraciones destacando su utilidad para la PDT. Estudiar la genotoxicidad de un compuesto determinado resulta de especial interés para drogas que se estudien con potenciales usos terapeuticos, como en nuestro caso, los complejos de Cr(III).  En terapia fotodinámica se espera que el fotosensibilizador no genere daño en ausencia de luz.   Por los presentes resultados, el Cr(phen)33+  en su estado basal, no produciría daño genotóxico sobre las células CHO-K1.  A pesar de que las sales de Cromo en estados de oxidación mas altos, son genotóxicas y mutagénicas; con estos complejos de Cr(III), no se estaría observando daño a ADN nuclear.     A cada muestra se le midió con azul de tripan, la viabilidad celular, para asegurarnos que la presencia de COMETA se debe a un tratamiento genotóxico y no a un proceso de muerte celular.  Acorde a la clasificación de Kobayashi et al. 1995, se observó en las muestras con nuestro tratamiento, núcleos aislados con daño tipo 3 y tipo 4.  Sin embargo dicho daño nuclear (menor al 5% del total de nucleos) se encuentra dentro del error experimental pues también se observó el mismo porcentaje de núcleos dañados en el control negativo.