CIBICI   14215
CENTRO DE INVESTIGACION EN BIOQUIMICA CLINICA E INMUNOLOGIA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Infección de líneas celulares murinas con HTLV-1 a través de un concentrado de virus libre
Autor/es:
BRITOS LUCAS FEDERICO; GOMEZ LUCÍA DEL PILAR; BALANGERO MARCOS; BELKYS MALETTO; PISTORESI M.CRISTINA; LUJÁN HUGO; GABRIEL MORÓN; GALLEGO SANDRA
Lugar:
Córdoba
Reunión:
Congreso; XXVI Reunión científica anual de la SAV (Sociedad Argentina de Virología); 2006
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Virología
Resumen:
Hasta el momento no existe una vacuna efectiva para prevenir la infección causada por HTLV-1, ni tampoco vacunas terapéuticas para el tratamiento de los individuos que ya han adquirido la enfermedad neurológica denominada Paraparesia Espástica Tropical (PET). Una vacuna efectiva debería ser capaz de reducir la carga viral mediante la neutralización del virus libre y del virus presente en las células infectadas productivamente. La neutralización viral puede realizarse induciendo la producción de anticuerpos neutralizantes específicos. Se ha demostrado in vitro que los anticuerpos neutralizantes anti- env son capaces de neutralizar cepas de HTLV-1 aisladas en diferentes regiones geográficas. Son varios los autores que sostienen que no es posible la infección de células con virus HTLV-1 libre. Sin embargo, recientemente algunos autores han descripto que esto si es posible. El objetivo de este trabajo fue infectar in vitro  líneas celulares murinas con virus HTLV-1 libre. Las células murinas infectadas serán utilizadas posteriormente para la inmunización e infección de ratones para ensayos de obtención de anticuerpos monoclonales y neutralización viral. Materiales y Métodos: Se utilizaron las siguientes líneas celulares murinas EL-4 y Sp2/0-Ag14 para infectar con virus libre. El virus se obtuvo del sobrenadante de las células MT-2 según los protocolos descriptos (Feng 2001, Sun 2002) con modificaciones. La detección de la infección de las líneas celulares se realizó por Nested-PCR in house ( Vandamme et al, 1997)  para amplificar las secuencias provirales e Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) para la detección de antígenos virales (Gallego et al, 1997).  Se realizaron ensayos de neutralización para verificar la efectividad de la infección de las células. Para esto se enfrentaron diluciones seriadas de un suero policlonal de un individuo infectado con HTLV-1 con el concentrado de virus libre. Luego se realizó la detección de antígenos virales y de provirus por IFI y Nested-PCR como ya fue descrito. Resultados: Logramos infectar exitosamente las células EL-4 y SP2/0-Ag14 con concentrados de virus libre. La infección fue corroborada detectando ADN proviral a diferentes tiempos post-infección. El ensayo de neutralización con el suero policlonal confirmó la efectividad de la infección de ambas líneas celulares. Conclusión: Usando preparados de virus libre, logramos infectar líneas celulares murinas con HTLV-1 lo que abre la posibilidad de estandarizar las condiciones para infectar ratones con HTLV-1. El tener un modelo murino de inmunización/ infección nos permitirá evaluar la respuesta inmune celular y humoral in vivo frente a diferentes péptido de HTLV-1 y evaluar la capacidad protectiva de las futuras vacunas.