CIBICI   14215
CENTRO DE INVESTIGACION EN BIOQUIMICA CLINICA E INMUNOLOGIA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Grucunoloxilomanano de Cryptococcus neoformans induce apoptosis de macrófagos mediada por óxido nítrico
Autor/es:
CHIAPELLO LS, BARONETTI JL, MASIH DT
Lugar:
Mar del Plata, Argentina
Reunión:
Jornada; LI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica y LIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2006
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Inmunología
Resumen:
Glucuronoxilomanano (GXM) es el componente mayoritario de la cápsula del hongo levaduriforme Cryptococcus neoformans. Durante las infecciones este polisacárido es secretado por el hongo durante su replicación y es retenido en macrófagos tisulares. En un modelo de criptococosis diseminada en ratas, observamos macrófagos tisulares apoptóticos con GXM intracelular. El objetivo de este trabajo fue investigar si GXM induce apoptosis de macrófagos (MÆ) de rata in vitro y los mecanismos asociados a este fenómeno. El GXM se obtuvo por precipitación con etanol y CTAB a partir de un cultivo de levaduras. Ratas Wistar se inyectaron con tioglicolato al 4% y los macrófagos se purificaron de lavados peritoneales, utilizando un gradiente de percoll y adherencia. Las células obtenidas expresaban aproximadamente 95 % de CD11 b/c, 85% de MCH II, 60% de ED2 y eran negativas para marcadores linfocitarios. Los MÆ se cultivaron (1 x 106) durante 24 o 48 h con 50 o 200 mg de GXM. Luego de 48 h de cultivo se observó que 200  mg de GXM inducen un 30 % de incremento en la hipodiploidía de MÆ (p < 0,00005 respecto a los controles; tinción con ioduro de propidio y citometría de flujo). La apoptosis se confirmó con anexina V, reacción de TUNEL y retención mitocondrial de TMRE. Con el agregado de diferentes inhibidores a los cultivos se observó que aminoguanidina (AG, inhibidor de la iNOS) revertía totalmente la muerte celular inducida por GXM, demostrando la participación de óxido nítrico (NO) en este fenómeno. GXM inducía NO en macrófagos, de manera dosis dependiente (determinado por reacción de Griess) y 200  mg de este polímero causaban una fuerte expresión de iNOS (por Western blot) a las 24 h de cultivo (p < 0,000001, respecto a los controles). La inducción de NO por GXM fue dependiente de la fagocitosis y activación de proteínas kinasas C. Este es el primer reporte que muestra la capacidad de GXM para inducir óxido nítrico y su participación en la muerte celular de macrófagos.