Caracterizacion inmunologica y genetica del sistema de resistencia a multixenobioticos en Jenynsia multidentata y su respuesta a Microcistina-LR

AME, MARIA VALERIA; BOCCO, JOSE LUIS; WUNDERLIN, DANIEL ALBERTO

Los Cocos

Simposio; 1er Simposio SETAC Argentina; 2006

SETAC

El Sistema de Resistencia a Multixenobi¨®ticos (MXR) ha sido identificado en numerosos organismos acu¨¢ticos y se propone como posible biomarcador de contaminaci¨®n. La prote¨ªna efectora de esta funci¨®n es una P-glicoprote¨ªna (P-gp) que est¨¢ involucrada en la eliminaci¨®n desde el interior celular de variados compuestos t¨®xicos end¨®genos y ex¨®genos. El objetivo de este trabajo fue caracterizar gen¨¦tica e inmunol¨®gicamente el sistema MXR en distintos ¨®rganos de Jenynsia multidentata y su respuesta a la cianotoxina Microcistina-LR. La expresi¨®n de P-gp en en h¨ªgado, cerebro, branquias e intestino de J. multidentata se evalu¨® por Western Blot (WB) utilizando anticuerpos monoclonales (C219). En h¨ªgado y branquias se identific¨® una banda de ~170 KD. En cerebro se detect¨® una banda de ~85 KD. No se identificaron bandas en el extracto de intestino. Paralelamente, se estim¨® la expresi¨®n de P-gp en los distintos ¨®rganos de J. multidentata por RT-PCR semi-cuantitativa utilizando primers espec¨ªficos para esta prote¨ªna y ¦Â-actina como control interno (Alpermann et al., 1999). Posteriormente, se realizaron dos exposiciones: J. multidentata vs. Microcistina-LR 2, 5 y 10 ¦Ìg.L-1 por 24 h y J. multidentata vs. Microcistina-LR 2 ¦Ìg.L-1  por 6, 12 y 24 h. Se procesaron en paralelo peces control. Se observ¨® un ligero aumento de la expresi¨®n de P-gp por WB y RT-PCR en h¨ªgado en ambas exposiciones, si bien este incremento no fue estad¨ªsticamente significativo. Al analizar la expresi¨®n en cerebro por WB no se observaron cambios a distintas concentraciones de MC-LR. Sin embargo, al evaluar la respuesta a distintos tiempos se observa un pico a las 6 h explicando lo observado en el ensayo a 24 hs. En branquias se observa un aumento significativo en la expresi¨®n de P-gp por WB a distintas concentraciones de MC-LR con respecto al control y se observa claramente el aumento progresivo en esta expresi¨®n en funci¨®n del tiempo. Por RT-PCR se observa en este ¨®rgano un pico del mARN anterior al de la prote¨ªna. Si bien se requieren ensayos adicionales, estos resultados sugieren  que P-gp podr¨ªa utilizarse como biomarcador de contaminaci¨®n midiendo su expresi¨®n en branquias o cerebro de J. multidentata a tiempos cortos por RT-PCR y a tiempos mayores por WB.