Modelo de retinopatía inducida por oxigeno (OIR): caracterización y expresión de IGF-1R

LORENC VE; LUNA JD; CHIABRANDO GA; SANCHEZ MC

Bs As

Congreso; IX Congreso De la Asociacion de Vision y Oftalmologia; 2012

AIVO

Objetivos. Diversas patologías oculares, incluyendo la retinopatía diabética proliferativa (RDP) y la retinopatía del prematuro (ROP), son el resultado de una neovascularización patológica. Diferentes modelos animales, como el de retinopatía inducida por oxigeno (OIR), han sido desarrollados con el propósito de entender los mecanismos celulares y moleculares que producen estas enfermedades. Uno de los factores de crecimiento involucrados tanto en el desarrollo fisiológico de la vasculatura retinal como en el patológico durante la ROP y RD es el factor de crecimiento simil-insulina (IGF-1). Por lo tanto resulta de gran interés poder elucidar el la retinopatía del prematuro (ROP), son el resultado de una neovascularización patológica. Diferentes modelos animales, como el de retinopatía inducida por oxigeno (OIR), han sido desarrollados con el propósito de entender los mecanismos celulares y moleculares que producen estas enfermedades. Uno de los factores de crecimiento involucrados tanto en el desarrollo fisiológico de la vasculatura retinal como en el patológico durante la ROP y RD es el factor de crecimiento simil-insulina (IGF-1). Por lo tanto resulta de gran interés poder elucidar el Diversas patologías oculares, incluyendo la retinopatía diabética proliferativa (RDP) y la retinopatía del prematuro (ROP), son el resultado de una neovascularización patológica. Diferentes modelos animales, como el de retinopatía inducida por oxigeno (OIR), han sido desarrollados con el propósito de entender los mecanismos celulares y moleculares que producen estas enfermedades. Uno de los factores de crecimiento involucrados tanto en el desarrollo fisiológico de la vasculatura retinal como en el patológico durante la ROP y RD es el factor de crecimiento simil-insulina (IGF-1). Por lo tanto resulta de gran interés poder elucidar el mecanismo de participación del sistema IGF-1 IGF-1R en patologías neovasculares retinales como las antes mencionadas, consideradas por su alta incidencia, de gran importancia en la población Argentina. como las antes mencionadas, consideradas por su alta incidencia, de gran importancia en la población Argentina. -1 IGF-1R en patologías neovasculares retinales como las antes mencionadas, consideradas por su alta incidencia, de gran importancia en la población Argentina. Materiales y métodos. Utilizamos el modelo de OIR en ratones, que además de reproducir la ROP presenta algunas características de la RDP. Para ello, ratones C57BL/6 fueron colocados en el día posnatal 7 (P7), en una cámara con una concentración de oxigeno constante del 75%, durante 5 días. Luego, los animales fueron trasladados a una condición de oxigeno normal (21%), por otros 5 días más. Otro grupo de ratones de la misma edad fueron mantenidos en oxígeno ambiental (21%) para ser empleados como control. Todos los animales fueron sacrificados en P17. Los ojos de los ratones fueron extraidos y fijados a 4 % PFA, seguido por un gradiente de sucrosa (10 y 30 %) y utilizados tanto para la obtención de criocortes retinales asi como para retinas completas (flat mounts). Con el objeto de identificar neovasos y localización del sistema IGF-1 IGF-1R se utilizaron diferentes anticuerpos y/o glicoproteinas conjugadas con un fluorocromo o biotina. Las imágenes de los tejidos fueron obtenidas usando un microscopio confocal Olympus Fluoview FV1000. conjugadas con un fluorocromo o biotina. Las imágenes de los tejidos fueron obtenidas usando un microscopio confocal Olympus Fluoview FV1000. un gradiente de sucrosa (10 y 30 %) y utilizados tanto para la obtención de criocortes retinales asi como para retinas completas (flat mounts). Con el objeto de identificar neovasos y localización del sistema IGF-1 IGF-1R se utilizaron diferentes anticuerpos y/o glicoproteinas conjugadas con un fluorocromo o biotina. Las imágenes de los tejidos fueron obtenidas usando un microscopio confocal Olympus Fluoview FV1000. conjugadas con un fluorocromo o biotina. Las imágenes de los tejidos fueron obtenidas usando un microscopio confocal Olympus Fluoview FV1000. ROP presenta algunas características de la RDP. Para ello, ratones C57BL/6 fueron colocados en el día posnatal 7 (P7), en una cámara con una concentración de oxigeno constante del 75%, durante 5 días. Luego, los animales fueron trasladados a una condición de oxigeno normal (21%), por otros 5 días más. Otro grupo de ratones de la misma edad fueron mantenidos en oxígeno ambiental (21%) para ser empleados como control. Todos los animales fueron sacrificados en P17. Los ojos de los ratones fueron extraidos y fijados a 4 % PFA, seguido por un gradiente de sucrosa (10 y 30 %) y utilizados tanto para la obtención de criocortes retinales asi como para retinas completas (flat mounts). Con el objeto de identificar neovasos y localización del sistema IGF-1 IGF-1R se utilizaron diferentes anticuerpos y/o glicoproteinas conjugadas con un fluorocromo o biotina. Las imágenes de los tejidos fueron obtenidas usando un microscopio confocal Olympus Fluoview FV1000. conjugadas con un fluorocromo o biotina. Las imágenes de los tejidos fueron obtenidas usando un microscopio confocal Olympus Fluoview FV1000. un gradiente de sucrosa (10 y 30 %) y utilizados tanto para la obtención de criocortes retinales asi como para retinas completas (flat mounts). Con el objeto de identificar neovasos y localización del sistema IGF-1 IGF-1R se utilizaron diferentes anticuerpos y/o glicoproteinas conjugadas con un fluorocromo o biotina. Las imágenes de los tejidos fueron obtenidas usando un microscopio confocal Olympus Fluoview FV1000. conjugadas con un fluorocromo o biotina. Las imágenes de los tejidos fueron obtenidas usando un microscopio confocal Olympus Fluoview FV1000. Utilizamos el modelo de OIR en ratones, que además de reproducir la ROP presenta algunas características de la RDP. Para ello, ratones C57BL/6 fueron colocados en el día posnatal 7 (P7), en una cámara con una concentración de oxigeno constante del 75%, durante 5 días. Luego, los animales fueron trasladados a una condición de oxigeno normal (21%), por otros 5 días más. Otro grupo de ratones de la misma edad fueron mantenidos en oxígeno ambiental (21%) para ser empleados como control. Todos los animales fueron sacrificados en P17. Los ojos de los ratones fueron extraidos y fijados a 4 % PFA, seguido por un gradiente de sucrosa (10 y 30 %) y utilizados tanto para la obtención de criocortes retinales asi como para retinas completas (flat mounts). Con el objeto de identificar neovasos y localización del sistema IGF-1 IGF-1R se utilizaron diferentes anticuerpos y/o glicoproteinas conjugadas con un fluorocromo o biotina. Las imágenes de los tejidos fueron obtenidas usando un microscopio confocal Olympus Fluoview FV1000. conjugadas con un fluorocromo o biotina. Las imágenes de los tejidos fueron obtenidas usando un microscopio confocal Olympus Fluoview FV1000. un gradiente de sucrosa (10 y 30 %) y utilizados tanto para la obtención de criocortes retinales asi como para retinas completas (flat mounts). Con el objeto de identificar neovasos y localización del sistema IGF-1 IGF-1R se utilizaron diferentes anticuerpos y/o glicoproteinas conjugadas con un fluorocromo o biotina. Las imágenes de los tejidos fueron obtenidas usando un microscopio confocal Olympus Fluoview FV1000. conjugadas con un fluorocromo o biotina. Las imágenes de los tejidos fueron obtenidas usando un microscopio confocal Olympus Fluoview FV1000. a 4 % PFA, seguido por un gradiente de sucrosa (10 y 30 %) y utilizados tanto para la obtención de criocortes retinales asi como para retinas completas (flat mounts). Con el objeto de identificar neovasos y localización del sistema IGF-1 IGF-1R se utilizaron diferentes anticuerpos y/o glicoproteinas conjugadas con un fluorocromo o biotina. Las imágenes de los tejidos fueron obtenidas usando un microscopio confocal Olympus Fluoview FV1000. conjugadas con un fluorocromo o biotina. Las imágenes de los tejidos fueron obtenidas usando un microscopio confocal Olympus Fluoview FV1000. -1 IGF-1R se utilizaron diferentes anticuerpos y/o glicoproteinas conjugadas con un fluorocromo o biotina. Las imágenes de los tejidos fueron obtenidas usando un microscopio confocal Olympus Fluoview FV1000. Resultados. Por hematoxilina eosina observamos la presencia de ovillos neovasculares hacia la cavidad vítrea en retinas de ratón después del tratamiento con oxígeno, los cuales fueron confirmados mediante la utilización de la lectina Griffonia simplicifolia isolectin B4 (GSA). Dado que este modelo produce estrés a nivel de las células gliales de Müller (gliosis) debido a la hipoxia generada, la expresión de la proteína ácida fibrilar glial (GFAP), también fue observada. Finalmente cuando analizamos la expresión de IGF-1R a P17 en el modelo de OIR, observamos un cambio en la distribución del receptor producido por una modificación en la estructura de la retina neural. que este modelo produce estrés a nivel de las células gliales de Müller (gliosis) debido a la hipoxia generada, la expresión de la proteína ácida fibrilar glial (GFAP), también fue observada. Finalmente cuando analizamos la expresión de IGF-1R a P17 en el modelo de OIR, observamos un cambio en la distribución del receptor producido por una modificación en la estructura de la retina neural. cavidad vítrea en retinas de ratón después del tratamiento con oxígeno, los cuales fueron confirmados mediante la utilización de la lectina Griffonia simplicifolia isolectin B4 (GSA). Dado que este modelo produce estrés a nivel de las células gliales de Müller (gliosis) debido a la hipoxia generada, la expresión de la proteína ácida fibrilar glial (GFAP), también fue observada. Finalmente cuando analizamos la expresión de IGF-1R a P17 en el modelo de OIR, observamos un cambio en la distribución del receptor producido por una modificación en la estructura de la retina neural. que este modelo produce estrés a nivel de las células gliales de Müller (gliosis) debido a la hipoxia generada, la expresión de la proteína ácida fibrilar glial (GFAP), también fue observada. Finalmente cuando analizamos la expresión de IGF-1R a P17 en el modelo de OIR, observamos un cambio en la distribución del receptor producido por una modificación en la estructura de la retina neural. Por hematoxilina eosina observamos la presencia de ovillos neovasculares hacia la cavidad vítrea en retinas de ratón después del tratamiento con oxígeno, los cuales fueron confirmados mediante la utilización de la lectina Griffonia simplicifolia isolectin B4 (GSA). Dado que este modelo produce estrés a nivel de las células gliales de Müller (gliosis) debido a la hipoxia generada, la expresión de la proteína ácida fibrilar glial (GFAP), también fue observada. Finalmente cuando analizamos la expresión de IGF-1R a P17 en el modelo de OIR, observamos un cambio en la distribución del receptor producido por una modificación en la estructura de la retina neural. que este modelo produce estrés a nivel de las células gliales de Müller (gliosis) debido a la hipoxia generada, la expresión de la proteína ácida fibrilar glial (GFAP), también fue observada. Finalmente cuando analizamos la expresión de IGF-1R a P17 en el modelo de OIR, observamos un cambio en la distribución del receptor producido por una modificación en la estructura de la retina neural. Griffonia simplicifolia isolectin B4 (GSA). Dado que este modelo produce estrés a nivel de las células gliales de Müller (gliosis) debido a la hipoxia generada, la expresión de la proteína ácida fibrilar glial (GFAP), también fue observada. Finalmente cuando analizamos la expresión de IGF-1R a P17 en el modelo de OIR, observamos un cambio en la distribución del receptor producido por una modificación en la estructura de la retina neural. Conclusión. Los resultados demuestran que hemos podido reproducir en nuestro laboratorio el modelo de OIR y que luego del tratamiento con oxígeno los animales modificaron la expresión de IGF1R en la retina neural de estos animales. modelo de OIR y que luego del tratamiento con oxígeno los animales modificaron la expresión de IGF1R en la retina neural de estos animales. Los resultados demuestran que hemos podido reproducir en nuestro laboratorio el modelo de OIR y que luego del tratamiento con oxígeno los animales modificaron la expresión de IGF1R en la retina neural de estos animales.