CIBICI   14215
CENTRO DE INVESTIGACION EN BIOQUIMICA CLINICA E INMUNOLOGIA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Aumento de la actividad de metaloproteinasas (MMPs) y la capacidad migratoria de células neoplásicas tiroideas inducida por la interacción célula tumoral-fibroblastos
Autor/es:
DELLA VEDOVA AB; REMEDI MM; GILARDONI M; MASINI-REPISO AM; PELLIZAS C; DONADIO AC
Lugar:
Córdoba
Reunión:
Jornada; XIV Jornadas Científicas Anuales de la Sociedad de Endocrinología y Metabolismo de Córdoba; 2012
Resumen:
Introducción y Objetivos: El carcinoma tiroideo es la neoplasia endócrina más frecuente. Más del 90% son carcinomas diferenciados, comprendiendo los subtipos papilar y folicular. El carcinoma anaplásico representa menos del 1%, siendo uno de los más agresivos. Los tumores sólidos están constituidos por células tumorales y otros tipos celulares como células endoteliales, musculares lisas, células del sistema inmune y fibroblastos (Fb) junto a componentes de matriz extracelular (MEC), las que conforman el estroma o microambiente tumoral. El fenotipo tumoral está fuertemente influenciado por su microambiente. Así, proteasas como MMPs y enzimas del sistema fibrinolítico, liberadas por células del estroma, no sólo degradan MEC facilitando la movilidad e invasión celular sino que pueden inducir inestabilidad genómica, estimulando la tumorigénesis y la transición epitelio-mesénquima. En un modelo de carcinoma tiroideo en ratas fue demostrada la relevancia de los Fb en el crecimiento tumoral in vivo. Sin embargo no existen hasta el momento estudios que profundicen en el impacto que tendría la interacción entre Fb y células tumorales tiroideas en la promoción de la invasión y diseminación tumoral. En el presente trabajo, utilizando un modelo in vitro que simula la interacción célula tumoral-estroma, nos planteamos como objetivo caracterizar el impacto de la interacción célula tumoral tiroidea-Fb en la capacidad migratoria de la célula tumoral, evaluando la producción de MMPs y su grado de activación así como la migración de células tiroideas inducida por el co-cultivo con Fb. Material y Métodos: Células tumorales tiroideas de carcinoma papilar (TPC-1) y anaplásico (8505) y células tiroideas humanas normales (N-ThyOri) fueron cultivadas en presencia (co-cultivos) y ausencia de Fb normales, como un modelo in vitro de la interacción célula tumoral-estroma. La evaluación de MMP2 y MMP9 se realizó en los sobrenadantes de cultivo (medios condicionados, MCs) mediante zimografías y su localización celular en células aisladas y co-cultivadas, por inmunofluorescencia indirecta. La migración de células tiroideas, inducida por su incubación con MCs, se evaluó mediante el ?ensayo de cierre de la herida?. El porcentaje de células migratorias se determinó marcando el citoesqueleto de actina con phalloidina-rodamina considerándose móviles aquellas que presentaban filopodios y/o lamelipodios, en 10 campos seleccionados al azar. La significación estadística se estableció utilizando el test de ANOVA o el test de Fisher. Resultados: El co-cultivo célula tumoral tiroidea-Fb produjo un aumento de la secreción de MMP9 y MMP2 a los MCs, destacándose el aumento de la forma activa de MMP2, tanto con células TPC-1 como 8505. El estudio de la localización celular de estas enzimas evidenció el aumento de la expresión de MMP9 fundamentalmente a nivel de los Fb co-cultivados. Por otra parte, MMP2 cambió en su localización celular, desde una distribución citoplasmática en Fb aislados a una localización en membrana plasmática en los Fb co-cultivados. El co-cultivo Fb-N-ThyOri no mostró cambios significativos en el perfil de MMPs secretadas. El porcentaje de células TPC-1 y 8505 migratorias aumentó significativamente en presencia de MCs obtenidos del cultivo de Fb (células TPC-1 y 8505) y del co-cultivo Fb-célula tumoral (células 8505, p≤0,05, Test de Fisher). El porcentaje de células N-ThyOri migratorias no se modificó significativamente en ninguna de las condiciones ensayadas. Un aumento significativo (p≤0,05 Kruskall Wallis test) en la migración fue observado solo en las células 8505, cuando estas fueron cultivadas 24 hs con MCs obtenidos del cultivo de Fb y del co-cultivo Fb-célula tumoral. Conclusiones: La interacción célula tumoral-Fb induciría la síntesis y activación de enzimas proteolíticas, involucradas en la digestión de MEC, facilitando la migración y movilidad celular. Factores solubles sintetizados por los Fb serían relevantes en la promoción de fenotipos invasivos de la célula tumoral tiroidea.