CIBICI   14215
CENTRO DE INVESTIGACION EN BIOQUIMICA CLINICA E INMUNOLOGIA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
"La Fosforilación de ZEB1 Mediada por MEK/ERK Regula su Función y Localización Subcelular"
Autor/es:
LORENZATTI G; CAVALLO N; DARLING D; CABANILLAS AM
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
ZEB1 interviene en diferenciación mesodérmica y EMT en cáncer. Es regulado a distintos niveles y la expresión de isoformas fosforiladas podría representar un mecanismo novel. Nuestro objetivo fue identificar los sitios de fosforilación en ZEB1 y su rol fisiológico. ZEB1 hipoPO4 se une y reprime más a genes blanco (EMSAs y genes reporteros). Identificamos fosfositios en dominio ZD2 por mutagénesis sitio-dirigida (S/T por A). ZD2 nativa (wt) y el set de mutantes mZD2-2A/B/C redujeron igualmente la actividad luciferasa de promotores (E-cadherina, ZEB1); el set mZD2-1A/B indujo mayor represión ya que se comportarían como mejores ?represores? (respecto a wtZD2) al poseer fosfositios silenciados e inducir una unión más fuerte a los promotores y mayor efecto transcripcional.  EMSAs concordaron con estos resultados.  Señales involucradas: la inhibición de PKC (CalC) (revertida por PMA/IONO), PI3K (LY294002) y MEK/ERK (PD98059) aumentó la unión de ZEB1 a promotores. En transfecciones PMA/IONO e IGF-1 revirtieron el efecto represor de wtZD2 y de mZD2-2, pero no el de mZD2-1. PD98059 aumentó la represión del promotor de E-cadherina inducida por wtZD2 y mZD2-2; consistentemente, mZD2-1 no respondieron a este inhibidor sugiriendo que MEK/ERK  activadas por IGF-1 regularían el rol biológico de ZEB1. Inmunoprecipitación con anti-fosfo-(Thr)MAPK reveló que ZEB1 es fosforilado por MAPK en T867 del set mZD2-1 (PD98059 disminuyó esta señal). El uso de clones GFP-ZEB1 y microspía confocal mostró que la fosforilacion por MEK/ERK inducida por IGF-1 cambió ZEB1 del núcleo al citosol, mientras que PMA/IONO dio una señal citosólica débil. En síntesis, ZEB1 es regulada por fosforilación vía IGF-1/MEK-ERK (modifica localización nuclear) y de otras vías como PKC. TGFb regula la actividad transcripcional de ZEB1 oponiéndose a IGF-1. Estos resultados sugerirían que ZEB1 sería el sitio de convergencia de señales de signo opuesto para la regulación fina del programa  EMT para la invasión tumoral.