PolyU modifica el procesamiento de antígenos exógenos en células dendríticas (DCs) permitiendo una mayor presentación cruzada de antígenos

MARÍA INÉS CRESPO; ESTEFANÍA ZACCA; BELKYS A. MALETTO; MARÍA C PISTORESI- PALENCIA.; GABRIEL MORÓN

Tucuman

Congreso; Reunión anual de SAI 2011; 2011

Sociedad Argentina de Inmunología.

Previamente mostramos que DCs de bazo de ratones C57BL/6 incubadas con ovalbúmina (OVA) en presencia de PolyU (ligando de TLR7) inducen una fuerte respuesta CTL anti-OVA, por un aumento de la presentación cruzada de OVA. Esta presentación requiere la participación del canal Sec61 para la salida de OVA al citoplasma y su degradación por el proteosoma. Para develar los mecanismos involucrados, evaluamos si la captura de OVA por DCs es afectada por PolyU. Se incubaron DCs con OVA-FITC más PolyU estabilizado con DOTAP (PolyU/DO) o sólo DOTAP. Por citometría de flujo observamos que DCs estimuladas con PolyU/DO capturan más OVA que DCs incubadas sólo con DOTAP (p<0,05).A continuación medimos el valor de pH en fagosomas de DCs por citometría de flujo. El pH fagosomal es menos ácido en DCs que en otros fagocitos y esto se ha relacionado con su capacidad de realizar presentación cruzada de Ags. Encontramos que DCs estimuladas con PolyU/DO presentan fagosomas con un pH más alcalino que las DCs no estimuladas (p<0,05) hasta 30 min post-estímulo. Luego evaluamos las consecuencias funcionales de dicho pH más alcalino, en términos del procesamiento de OVA. Se determinó por citometría de flujo la cantidad de OVA remanente en DCs incubadas con perlas de látex conjugadas a OVA. Observamos una marcada degradación de OVA en DCs no estimuladas a diferencia de las DCs estimuladas con PolyU/DO (p<0,01). Finalmente evaluamos la permanencia del complejo H-2Kb/OVA257-264 (MHC I/Ag) en la superficie de DCs incubadas con el péptido OVA257-264 en presencia de PolyU/DO o DOTAP por 90 min. Luego, fueron marcadas con una IgG1 que reconoce el complejo H-2Kb/OVA257-264 e incubadas por distintos tiempos. Finalmente, se utilizó un anticuerpo anti-IgG1 para detectar los complejos en la superficie celular. DCs tratadas con PolyU/DO mostraron una mayor permanencia del complejo H-2Kb/OVA257-264 sobre su superficie que DCs en condiciones basales (p<0,05), en particular en DCs convencionales CD8α+ y en DCs plasmacitoideas. En conclusión, PolyU estimula la presentación cruzada en DCs aumentando la captura de Ags y su preservación, probablemente impidiendo la acidificación fagosomal temprana y así evitando una excesiva degradación de Ags. Además, PolyU aumenta la estabilidad de los complejos H-2Kb/OVA257-264 sobre la superficie de la DC, incrementando las posibilidades de interactuar con los TCR de los linfocitos T CD8.