El Factor De Crecimiento Insul¨ªnico Tipo 1 (IGF-1) Promueve A Trav¨¦s De Su Receptor (IGF-1R) Migraci¨®n De C¨¦lulas Gliales De M¨¹ller

LORENC VE, ORTIZ SG, S¨¢NCHEZ MC

Buenos Aires

Congreso; AIVO (Asociacion de Investigacion en Vision y Oftalmologia); 2011

Objetivos: Tanto el ligando IGF-1 como su receptor (IGF-1R) tienen una activa participaci¨®n durante el desarrollo vascular retinal as¨ª como en la patog¨¦nesis de la Retinopatia de la Prematurez (ROP) y la Retinopat¨ªa Diab¨¦tica Proliferativa (RDP). En estas patolog¨ªas, se conoce que las c¨¦lulas gliales de M¨¹ller (CM) cumplen un rol importante al producir el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y secretar MMPs que participan en la prote¨®lisis extracelular. Previamente hemos demostrado que IGF-1 regula la capacidad migratoria de c¨¦lulas gliales de M¨¹ller en un mecanismo que involucra la activaci¨®n de MMP-2. En este trabajo evaluamos la activaci¨®n de IGF-1R por su ligando y el efecto de esta activaci¨®n sobre la regulaci¨®n de MMPs. Materiales y m¨¦todos: En todos los experimentos se utiliz¨® una l¨ªnea inmortalizada de c¨¦lulas gliales retinales, MIO-M1. Para analizar la activaci¨®n de IGF-1R, las c¨¦lulas fueron estimuladas con IGF-1 (10nM) por 10 minutos y luego evaluadas por ensayos de Western blot (WB) utilizando un anticuerpo anti pIGF-1R. Con el fin de investigar la especificidad de interacci¨®n ligando receptor, c¨¦lulas MIO-M1 previo al estimulo, fueron pre incubadas con un anticuerpo bloqueante anti IGF-1R (¦ÁIR3) durante 30 minutos y luego los lisados celulares evaluados por WB. Posteriormente y con el objeto de analizar si la regulaci¨®n de MMPs  era mediada por IGF-1R, c¨¦lulas estimuladas con  IGF-1 (10 nM) 4, 6 y 8 hs o previamente incubadas con ¦ÁIR3, fueron analizados por zimograf¨ªa. Finalmente, la migraci¨®n celular fue evaluada posterior a la preincubaci¨®n con el anticuerpo bloqueante, sobre placas de cultivo adsorvidas con diferentes prote¨ªnas de matriz, usando un microscopio Nikon TE 2000U. Resultados. Mediante ensayos de Western blot se observ¨® que IGF-1 (10nM) induce un incremento en la fosforilacion de su receptor (IGF-1R) a los 10 min, la cual fue bloqueada por la preincubaci¨®n con ¦ÁIR3. Tambi¨¦n demostramos que IGF-1 produce, en CM, una disminuci¨®n en la actividad de MMP-2 activa, y que este fen¨®meno fue revertido cuando se preincubaron las c¨¦lulas con el anticuerpo bloqueante. Finalmente tambi¨¦n observamos  que el aumento en la tasa de migraci¨®n producido por IGF-1 fue inhibido por ¦ÁIR3, indicando que estos eventos est¨¢n mediados por IGF-1R. Conclusi¨®n. Estos resultados demuestran que la fosforilacion de IGF-1R inducida por IGF-1 regula la activaci¨®n de MMP-2 y la migraci¨®n de las  c¨¦lulas gliales de M¨¹ller en cultivo.