Identificación de dermatofitos por PCR fingerprinting con (GACA)4, (GTG)5 o M13

SPESSO FLORENCIA; NUNCIRA TANIA; DIB MOISES; MASIH DIANA TERESA; CHIAPELLO LAURA

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiologia; 2010

Asociación Argentina de Microbiología

Objetivo: estandarizar la técnica  PCR fingerprinting para identificar especies de dermatofitos utilizando primers que hibridan con secuencias mini y microsatélites dispersas en el genoma. Materiales y métodos: Se recolectaron muestras de pacientes con sospecha clínica de dermatofitosis concurrentes al Servicio de Dermatología del Hospital Pediátrico del Niño Jesús  de Córdoba Capital. Las muestras fueron procesadas para examen directo con KOH 40% y cultivadas en medio de sabouraud y agar papa dextrosa. Luego de 20 días, se procedió a la tipificación de los cultivos positivos por las características macro y microscópicas de las colonias. Para la extracción de material genético se seleccionaron los siguentes dermatofitos: Microsporum canis (n=40), Microsporum gypseum (n=5), Trichophyton rubrum (n=13), Trichophyton mentagrophytes var. mentagrophytes (n=12) y Trichophyton tonsurans (n=1). Se obtuvo el ADN genómico a partir del micelio crecido en las colonias puras en pico de flauta, por pulverización con mortero y aire líquido, y la posterior extracción con fenol-cloroformo. Las reacciones de amplificación se realizaron utilizando los siguientes primers: (GACA)4 (5´-GACA GACA GACA GACA-3´), (GTG)5 (5´-GTG GTG GTG GTG GTG-3´) o M13  (5´-GAGGGTGGCGGTTCT-3´). Luego de la amplificación, se corrieron gel de agarosa al 2% con el agregado de SybreSafe (Invitrogen) para la visualización, a 50 V por 75 minutos en buffer TAE 1x. La reproducibilidad de las técnicas con los diferentes primers se evaluó realizando extracciones de DNA por duplicado y amplificando las