Rol de las hormonas tiroideas en la generación de una respuesta citotóxica específica de antígeno a través de la regulación de la función de células dendríticas

ALAMINO VA, MASCANFRONI ID, MONTESINOS MM, SUSPERREGUY S, MASINI-REPISO AM, RABINOVICH GA, PELLIZAS CG

Mar del Plata

Congreso; Congreso FASEN (Federación Argentina de Sociedades de Endocrinología) 2010; 2010

Federación Argentina de Sociedades de Endocrinología (FASEN)

  Las células dendríticas (CDs) son células presentadoras de antígeno (CPA) altamente especializadas que reconocen, procesan y presentan antígenos a las células T vírgenes para la inducción de respuestas inmunes antígeno-específicas. Recientemente, en nuestro laboratorio hemos proporcionado la primera evidencia de la expresión de receptores de hormona tiroidea (TRs) en CDs derivadas de médula ósea de ratón y su sorprendente localización en el compartimiento citoplasmético de CDs inmaduras (CDi) y maduras (CDm). Además, hemos demostrado que niveles fisiológicos de triiodotironina (T3) estimulan la maduración de las CDs y la producción de IL-12 y potencian la capacidad estimulatoria de la célula T direccionando una respuesta inmune hacia un perfil T-helper 1.  El objetivo de este trabajo fue investigar la capacidad de CDs estimuladas con T3 de modular la citotoxicidad antígeno específica in vivo y la presentación cruzada de antígeno in vitro.   Para analizar la citotoxicidad antígeno específica in vivo, 5x106 CDs fueron pulsadas con: 1)PBS(control), 2)OVA, 3)OVA+LPS(100ng/ml), 4)OVA+T3(5nM) por 30 minutos e inyectadas endovenosamente (ev) en cuatro grupos de ratones C57BL/6. Siete días post-inmunización, los ratones fueron inyectados ev con una mezcla (1:1) de 10x106 esplenocitos marcados con CFSE a distintas concentraciones (0.5mM y 3mM). Las c¨¦lulas marcadas con CFSE 3mM fueron estimuladas con el péptido OVA257-264 y las células CFSE 0.5mM no fueron pulsadas y sirvieron como control interno. Veinticuatro horas post-inyección los bazos de los ratones inmunizados fueron procesados para la determinación de la abundancia de células esplénicas marcadas con diferentes concentraciones de CFSE por citometría de flujo. Se observó que los ratones que fueron inyectados con CDs estimuladas con T3 presentaron una reducción en la población CFSE 3mM. Esto demuestra que las CDs tratadas con T3 que fueron inyectadas ev en los ratones,  tuvieron la capacidad de estimular a los linfocitos del ratón específicos para OVA, generando citotoxicidad antígeno específica. Para evaluar la presentación cruzada in vitro, CDs fueron pulsadas con 1) PBS (control), 2) OVA, 3) péptido OVA257-264, 4) OVA +T3 (5nM). Luego, las CDs fueron co-cultivadas durante toda la noche con células de hibridoma B3Z en diferentes proporciones CD:B3Z. El hibridoma B3Z es un hibridoma de linfocitos T, el cual reconoce OVA únicamente cuando es presentada en el contexto MHC clase I y expresa lacZ bajo el control transcripcional del promotor de IL-2. Después de la co-incubación, las células se lisaron por adición de una solución de o-nitrofenil-PD-galactósido (ONPG). La cantidad de enzima lacZ se cuantificó mediante la hidrólisis de ONPG, realizando la medición de la densidad óptica a 415 nm. Los resultados indicaron que T3 aumentó significativamente (P <0,01) la presentación cruzada de OVA evaluada a través del aumento de la actividad Lac Z. Se observó que este aumento se produjo en todas las proporciones B3Z:CD. Para evaluar si la presentación cruzada de antígeno inducida por T3 es dependiente de proteasoma, se procedió a realizar el experimento de presentación cruzada de la forma descripta anteriormente, pero las CDs  fueron tratadas previamente con MG-132, un inhibidor del proteasoma. Se observó que MG-132 inhibió de manera significativa (P <0,01) la presentación cruzada de antígeno producida por T3. Esto evidencia que la presentación cruzada producida por T3 es proteasoma dependiente. En este trabajo demostramos que T3 aumentó significativamente la capacidad de CDs para estimular una respuesta citotóxica antígeno-específica in vivo y presentación cruzada in vitro. Nuestros resultados proporcionan evidencia de un papel crítico de T3 en la inducción de una respuesta citotóxica antígeno-específica, la cual puede representar un blanco atractivo para la manipulación racional de la inmunogenicidad de las CDs, por ejemplo en inmunoterapia, incluyendo cáncer. También puede tener profunda implicancia en los diversos desórdenes inmunológicos evidenciados en las patologías tiroideas y nos permite ampliar el conocimiento de la interacción entre los sistemas inmune y endócrino.