El sistema Alfa 2 Macroglobulina (α2-M)/LRP1 induce la expresión de la proteína ácida fibrilar glial mediante la activación de STAT3.

LORENC VE; ORTIZ S; CHIABRANDO GA; SANCHEZ MC

Congreso; VII Congreso Nacional de la Asociación en Investigación en Visión y Oftalmología (AIVO) (2010).; 2010

Efecto del factor de crecimiento insulínico tipo 1 (IGF-1) en células gliales de Müller. Effect of Insulin-like growth factor 1 (IGF-1) on glial Müller cells.   Lorenc VE, Ortiz SG, Chiabrando GA, Sánchez MC. CIBICI (CONICET)-Dpto de Bioquímica Clínica. Facultad de Ciencias Químicas. Universidad Nacional de Córdoba. Argentina. vlorenc@fcq.unc.edu.ar. Objetivos: Tanto IGF-1 como su receptor (IGF-1R) presentan modificaciones en la expresión y localización tisular durante patologías retínales como la Retinopatía de la Prematurez (ROP) y la Retinopatía Diabética Proliferativa (RDP). Además, se conoce que las células de Müller (CM), principales células gliales de la retina, cumplen un rol crucial en estas enfermedades al producir el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y secretar metaloproteinasas. Previamente hemos demostrado que IGF-1 regula la capacidad migratoria de células gliales de Müller (MIO-M1) en un mecanismo que involucra la activación de MMP-2. En este trabajo investigamos si CM expresan IGF-1R con el propósito de indagar la activación de señales de transducción inducidas por IGF-1. Materiales y métodos. Para analizar la expresión de IGF-1R en células MIO-M1, las células en cultivo fueron estimuladas con IGF-1 (10nM) por 1, 4 y 8 hs y los lisados celulares analizados por ensayos de Western blot (WB). Bajo el mismo esquema experimental también evaluamos la fosforilación de IGF-1R. Además analizamos la expresión y fosforilación del receptor por microscopia de inmunofluorescencia (IF). Para analizar las vías de señalamiento intracelular, las células en SFB al 0,5% fueron estimuladas con IGF-1 durante diferentes intervalos de tiempo (1 a 20 min) y con distintas concentraciones de IGF-1 (0,1- 10 nM). Luego, los extractos proteicos fueron analizados por WB para ERK1/2 y Akt fosforilado. Con el fin de analizar la especificidad de interacción ligando-receptor, previamente al estimulo, las células fueron preincubadas con un anticuerpo anti IGF-1R (αIR3) durante 30 minutos y los lisados celulares analizados por ensayos WB. Resultados. Mediante ensayos de WB se observó que IGF-1 (10nM) induce un incremento en la fosforilacion de su receptor (IGF-1R) a 1 y 4 hs, manteniendo uniforme la expresión de IGF-1R, lo cual también fue evidenciado por ensayos de IF. También demostramos que IGF-1 produce en MIO-M1 una activación de MAPK-ERK1/2 y PI3K/Akt a distintas concentraciones (0,1, 1 y 10 nM) y tiempos (1, 5, 10, 15 y 10 min), indicando que estos eventos de transducción de señales están mediados por IGF-1R. αIR3, un inhibidor de la unión de IGF-1/IGF-1R disminuyo significativamente el efecto de IGF-1 sobre la activación de las vías de señalamiento. Conclusión. Estos resultados demuestran que CM expresan constitutivamente IGF-1R el cual no es modificado en presencia de su ligando. IGF-1 induce una rápida fosforilacion de su receptor especifico seguido de la activación de las vías de MAPK y PI3K . Estos resultados sugieren que el sistema IGF-1/IGF-1R mediaría los eventos  celulares de migración y activación de MMP-2. Subsidios y Agradecimientos: FONCyT, CONICET, SeCyT-UNC.