El sistema Alfa 2 Macroglobulina (α2-M)/LRP1 induce la expresión de la proteína ácida fibrilar glial mediante la activación de STAT3.

BARCELONA PF; ORTIZ S; CHIABRANDO GA; SANCHEZ MC

Congreso; VII Congreso Nacional de la Asociación en Investigación en Visión y Oftalmología (AIVO) (2010).; 2010

El sistema Alfa 2 Macroglobulina (α2-M)/LRP1 induce la expresión de la proteína ácida fibrilar glial mediante la activación de STAT3. Alpha2-Macroglobulin/LRP1 system induces glial fibrillary acidic protein expression by activation of STAT3. Barcelona PF; Ortiz SG; Chiabrando GA; Sánchez MC. CIBICI (CONICET) - Depto. de Bioquímica Clínica, Facultad de Ciencias Químicas, UNC. pbarcelona@mail.fcq.unc.edu.ar Objetivos: La proteína ácida fibrilar glial (del inglés, GFAP) constituye el principal Filamento Intermedio (FI) de las células gliales de Müller (CM), y su expresión es un indicador de ‘‘stress’’ en la retina durante desórdenes isquémicos proliferativos. Previamente demostramos una incrementada expresión de a2M en humor vítreo de pacientes con retinopatía diabética proliferativa así como en retinas de ratas con neovascularización inducida por hipoxia. En este modelo animal el receptor de a2M, LRP1, mostró niveles elevados de expresión en CM. Sin embargo, el rol funcional entre el sistema a2M/LRP1 y GFAP es al presente poco conocido. Nuestro objetivo fue analizar si el sistema α2M/LRP1 está  involucrado en la activación de las CM, a través de la inducción de GFAP, y evaluar la/s via/s de señalamiento involucrada/s en este proceso. Materiales y Métodos: Se utilizaron modelos experimentales in vitro e in vivo, los cuales consistieron en una línea inmortalizada de células gliales retinales, MIO-M1, así como en retinas de ratones que fueron microinyectados a nivel intravitreo con α2M, respectivamente. El efecto de α2M sobre la expresión de GFAP fue determinada por ensayos de  Western Blot y por microscopía de inmunofluorescencia (IF) en cultivos de células MIO-M1. Para analizar las vías de señalamiento intracelulares, los extractos proteicos de los lisados celulares fueron analizados por Western blot para p-ERK1/2 y p-STAT3. Finalmente, retinas de ratones C57BL/6 que recibieron una inyección intravítrea de 1,07 µg de α2M fueron analizadas por IF para GFAP y p-STAT3 a 1, 3 y 6 días post inyección. Resultados: La interacción a2M/LRP1 indujo la expresión de GFAP y la fosforilación de STAT3 en la línea celular MIO-M1. RAP, un inhibidor de la unión a2M/LRP1, disminuyó significativamente el efecto de α2M sobre el nivel de expresión de GFAP y de fosforilación de STAT3. Sin embargo, vimentina, otro FI, mostró una expresión uniforme. Posterior a la inyección intravítrea con a2M (3 y 6 días) se observó un incremento progresivo de la expresión de GFAP en áreas de la retina coincidentes con la localización de CM. Bajo el mismo esquema experimental a2M produjo un aumento en los niveles de p-STAT3 en la LCG y en la LNI posterior a los 3 días de tratamiento. Conclusiones: Demostramos que el sistema a2M/LRP1 promueve a nivel de CM, una expresión diferencial de GFAP respecto a otros FI. Considerando que a2M/LRP1 indujo la activación de JAK/STAT, estos resultados sugieren que esta vía de transducción de señales estaría involucrada en la expresión de GFAP.