ESTUDIO DE TcPic2 DE Trypanosoma cruzi COMO POSIBLE TRANSPORTADOR MITOCONDRIAL DE Cu

FARRONI, MV; MEDIAVILLA MG; CRICCO, JA

Jornada; XIV Jornadas de Ciencias, Tecnologías e Innovación. UNR; 2020

Universidad Nacional de Rosario

Trypanosoma cruzi, es el parásito causante de la enfermedad de Chagas. Por ser un parásito, necesita proveerse de metabolitos y cofactores esenciales de sus hospedadores para su supervivencia y entre ellos podemos mencionar a diversos iones metálicos como lo son los iones cobre (Cu), hierro (Fe), etc. El Cu constituye un cofactor esencial para organismos aerobios, pero en exceso resulta tóxico, por ello, se debe controlar importación, distribución intracelular, almacenamiento e inserción del Cu en las proteínas blanco. Hasta el presente no se ha estudiado la homeostasis de Cu en T. cruzi. Nuestra hipótesis plantea que T. cruzi incorpora Cu desde el hospedador y los transporta hacia la mitocondria para luego ser coordinadamente insertados en proteínas esenciales como la citrocromo c oxidasa. Objetivos: contribuir al conocimiento del transporte de iones metálicos esenciales en T. cruzi. Específicamente, estudiar si el marco abierto de lectura que denominamos TcPIC2 codifica para una proteína involucrada en el transporte de Cu mitocondrial del parásito. En esta primera etapa se trabajó con Saccharomyces cerevisiae (organismo que constituye un modelo validado en nuestro laboratorio para evaluar la función de proteínas de T. cruzi) deficientes en el transporte de Cu: pic2Δ (BY4741), mir1Δ (BY4741), pic2Δ mir1Δ (BY4741). PIC2 codifica para un transportador mitocondrial de fosfato y cobre y MIR1 codifica para un transportador mitocondrial involucrado en el transporte de Cu de función redundante con PIC2. A partir de ADN genómico de T. cruzi, se clonó TcPIC2 en plásmidos adecuados para su expresión en estas levaduras (pRS423.TcPIC2.HIS y pRS425.TcPIC2.HIS). Se evaluó la expresión de TcPIC2 cuando las células transformadas fueron desafiadas para crecer en medio definido suplementado con glucosa o glicerol-etanol (fuente de carbono no fermentable), altas concentraciones de Cu2SO4 y AgNO3, o en presencia de quelantes de Cu (TEPA o BCS). Resultados preliminares: Se construyeron los plásmidos necesarios para la expresión de TcPIC2 en estas cepas y se transformaron las mutantes de S. cerevisiae. Se comprobaron los fenotipos reportados de las mutantes de S. cerevisiae, y se definieron las condiciones para el estudio de TcPIC2 en estas levaduras.