Identificación y Clonado de dominios SRCR en oviducto porcino. ¿Similitudes entre Sperm Binding Glycoprotein (SBG) y Deleted in Malignant BrainTumors(DMBT1)?

ROLDÁN, L; TEIJEIRO, J. M.; MARINI, P. E

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LV Reunión Anual de La Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2010

El oviducto es el sitio donde las gametas expresan su capacidad fecundante e interaccionan en la fecundación. Estudios realizados en nuestro laboratorio describen a Sperm Binding Glycoprotein (SBG) como una proteína oviductal porcina relacionada a la selección negativa de espermatozoides.  El objetivo de este trabajo fue obtener y analizar la secuencia de SBG. Se identificaron péptidos de SBG a través de electroforesis bidimensional y espectroscopía de masa en tándem (LC-MS/MS). Estos se correspondían con dominios receptores scavenger ricos en cisteína (SRCR) reportados en la proteína deleted in malignant brain tumors (DMBT1). A partir de cebadores diseñados en base a la secuencia de aminoácidos obtenida mediante LC-MS/MS para SBG y ARNm de células epiteliales de oviducto, se obtuvieron por RT-PCR secuencias de ADNc que fueron clonadas y  secuenciadas. La comparación de las secuencias obtenidas con las de bancos de datos, utilizando BLASTp mostró 99% homología con un clon de DMBT1 reportado en ovario porcino. Las secuencias clonadas contienen 2 dominios CUB que flanquean a un dominio SRCR, un dominio ZP y la región transmembrana de DMBT1. Mediante ensayos de western blot, utilizando anticuerpos policlonales anti-SBG de cerdo y anti-DMBT1 humano, se detectaron bandas reactivas de la misma masa molecular obteniéndose a su vez una idéntica localización de ambas proteínas en cortes histológicos de oviducto porcino. Dado que utilizando cebadores diseñados en base a secuencias contenidas en dominios SRCR de SBG sólo pudieron clonarse secuencias de DMBT1, que anticuerpos anti-SBG y anti-DMBT1 reconocen una proteína de masa molecular semejante e idéntica localización, y considerando resultados previos de nuestro laboratorio que indican que la acción de SBG requiere interacción con espermatozoides homólogos, es probable que DMBT1/SBG sea la única proteína oviductal con dominios SRCR, y su función se vincule a la selección de espermatozoides.