Estudio del Efecto Antagónico de Gluconoacetobacter diazotrophicus sobre Ralstonia solanacearum (aislamiento argentino) in vitro y en Plantas de Arabidopsis thaliana

CARRAU A; CAMPAGNA MN; ORELLANO EG ; RODRIGUEZ MV; TANO J; FERRETTI MD; ANSALDI N; MARTINEZ ML ; CORTADI A,

Mar del Plata

Congreso; IV CAMyA, I MicroGen; 2018

CAMAyA-Congreso Argentino de Microbiología Agrícola y Ambiental

En la actualidad existe demanda de nuevos agroquímicos que tengan bajo impacto medioambiental. Gluconoacetobacter diazotrophicus Pal5 (Gb) pertenece a las llamadas PGPBEs (Plant-Growth-Promoting Bacterial Endophytes). La asociación planta- PGPBEs ofrece beneficios a la planta hospedadora, entre los cuales se encuentra la protección contra patógenos. Ralstonia solanacearum (Rso) es una bacteria fitopatógena de gran importancia debido a las pérdidas económicas que origina, atacando a una gran variedad de cultivos. El objetivo del presente trabajo fue el estudio de la acción de Gb en presencia de Rso, se realizaron ensayos de competencia in vitro y en plantas de Arabidopsis thaliana (L.) Heynh. durante el estrés biótico producido por la bacteria fitopatógena. Para los estudios de competencia in vitro placas con medio MS 1,5% (pv) fueron sembradas con 104 UFC/mL de la mezcla bacteriana Gb (medio LGI-p, 30ºC, agitación 200 rpm) y Rso (medio BG, 28ºC, agitación 200 rpm) y con las bacterias en solitario; se incubaron a 28ºC, 72 h. El crecimiento bacteriano se plaqueó en medios selectivos (mezcla y bacterias en solitario). Para los estudios in vivo se crecieron semillas de A. thaliana 14días en medio MS 0,5X, 1,5% (p/v) sacarosa; 0,8% (p/v) agar a 22ºC; 16h luz/8h oscuridad, luego se inocularon las plántulas con 106 UFC/mL de Gb Pal5, y se aclimataron en tierra 3 semanas. Las plantas control y las plantas con el endófito se inocularon posteriormente en raíz con 106 UFC/mL de Rso. Se tomaron muestras a 3, 6 y 9 días post inoculación con Rso (dpi), se fijaron en FAA (50% etanol, 5% ácido acético glacial, 30% formaldehido, 15% agua), se cortaron tallos a 12 µm de espesor y se tiñeron con safranina-fast green. Los ensayos de competencia in vitro a las 72 h mostraron una leve disminución del crecimiento de Rso en presencia de Gb, lo contrario ocurrió para Gb, que su crecimiento no disminuyó en presencia de Rso. A los 9 dpi las plántulas de A. thaliana inoculadas sólo con Rso estaban cloróticas y menos desarrolladas que aquellas inoculadas previamente con Gb. Los cortes transversales de tallo de las plantas que presentan el endófito Gb mostraron un aumento de xilema y mayor cantidad de tejido esclerosado entre los haces vasculares. También se observó mayor lignificación del xilema. A los 9 dpi con la bacteria Rso, se observó una estructura más conservada en las plantas que poseen el endófito (Rso +Gd). Los cambios anatómicos inducidos por Gb en las plantas de A. thaliana, como por ejemplo mayor deposición de lignina, forman parte de la respuesta de defensa frente a infecciones por bacterias fitopatógenas como Rso// al estrés biótico.