Cnbp como un posible regulador de la expresión de miembros de la familia Dlx

GIL ROSAS, MAUCO S; COUX, GABRIELA; CALCATERRA, NORA B; PASSOS-BUENO, M.R

Chascomús

Taller; Cnbp como un posible regulador de la expresión de miembros de la familia Dlx; 2018

En humanos hay 6 genes DLX, agrupados en 3 clústers bi-génicos: DLX1/DLX2, DLX5/DLX6 y DLX3/DLX4.En pez cebra, el clúster DLX presenta 8 genes: dlx1a/dlx2a, dlx2b, dlx5a/dlx6a y dlx3b/dlx4b, dlx4a.Estos genes codifican factores de transcripción que se consideran claves para entender lamorfogenética y la evolución craneofacial en vertebrados. Recientemente, encontramos que ladepleción de Cnbp (una proteína central para el desarrollo craneofacial en vertebrados) en pez cebraprovocaba la disminución de la expresión de dlx2a. Además, hemos informado una secuencia consensode interacción de Cnbp con ADN que suele coincidir con secuencias potenciales de cuádruplex de guanina (G4).Nos propusimos: i-detectar posibles sitios consenso para Cnbp y de formación de G4 en los promotoresde la familia DLX, de H. sapiens y de D. rerio. ii- caracterizar estas secuencias en cuanto a suplegamiento como G4 y su capacidad para interaccionar con Cnbp y iii-verificar la regulación de laexpresión de estos genes por Cnbp. Detectamos sitios consenso Cnbp en los promotores de Danio rerio(dlx2a, dlx5a y dlx6a) y Homo sapiens (DLX2, DLX5 y DLX6). Estos se superponen con secuenciasputativas de G4 (algoritmo Quadparser). Mediante dicroísmo circular y fluorescencia intrínseca del ADNverificamos que oligonucleótidos sintéticos con las secuencias de los G4 putativos de pez cebra sepliegan como tales. Al adicionar Cnbp purificada a la secuencia G4 de dlx5a en pez cebra disminuye laseñal de dicroísmo, sugiriendo la interacción y el despliegue del G4. Ensayos de inmunoprecipitación dela cromatina (ChIP) de pez cebra confirmaron la interacción de Cnbp con los sitios presentes en lospromotores de dlx5a y dlx2a. También se detectó una correlación positiva entre la expresión de CNBP yDLX5 en células mesenquimales humanas. Nuestros datos sugieren que CNBP modularía la expresiónde miembros de la familia DLX tanto en pez cebra como en el ser humano. Teniendo en cuenta el rolcentral de estos genes en el desarrollo de estructuras craneofaciales, nuestros hallazgos revistenimportancia para el entendimiento de la biología normal y patológica del desarrollo.