Caracterización de la enzima ácido fosfatídico fosfatasa y su relevancia en la síntesis de triacilglicéridos en micobacterias.

GRAMAJO, H; GAGO, G.; CROTTA ASIS, A

Rosario

Congreso; VIII Reunión de la Sociedad Latinoamericana de Tuberculosis y otras Micobacteriosis; 2016

SLAM-TB

CARACTERIZACIÓN DE LA ENZIMA ÁCIDO FOSFATÍDICO FOSFATASA Y SU RELEVANCIA EN LA SÍNTESIS DE TRIACILGLICÉRIDOS EN MICOBACTERIASAgostina Crotta Asis, Hugo Gramajo, Gabriela Gago.Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. IBR-CONICET, Rosario-Argentina. E-mail: crottaasis@ibr-conicet.gov.arIntroducción: Mycobacterium tuberculosis, el agente etiológico de la tuberculosis, infecta a un tercio de la población mundial y provoca la muerte de más de 2 millones de personas cada año. Las células huésped primarias de este bacilo son los macrófagos pulmonares, en las cuales, es capaz de replicarse activamente durante las primeras semanas de infección. Cuando la respuesta del sistema inmune del hospedador surte efecto, el reclutamiento continuo de linfocitos en el sitio de infección junto con la muerte de los macrófagos infectados lleva a la formación del granuloma, característica distintiva de la infección con M. tuberculosis. Dentro del granuloma, M. tuberculosis puede persistir décadas, en un estado de dormancia referido como latencia. La diferenciación de macrófagos en macrófagos espumosos (FM) es particularmente importante ya que se han detectado en individuos que han desarrollado la reactivación de una infección primaria de TB. Dentro de los FM, M. tuberculosis disminuye su tasa de multiplicación y acumula inclusiones lipídicas intracitoplasmáticas (ILI) en su propio citoplasma que consisten principalmente de triacilglicéridos (TAG). Sin embargo, los mecanismos por los cuales M. tuberculosis induce la diferenciación de estos macrófagos espumosos y mediante los cuales puede acumular ILI en su citoplasma dentro de las células infectadas todavía no se conocen. Objetivo: el objetivo general es elucidar el rol del paso enzimático clave que gobierna la decisión de M. tuberculosis de sintetizar TAG y, por lo tanto, enlentecer su crecimiento y entrar en el estado de dormancia. El objetivo principal de este trabajo es caracterizar a nivel bioquímico y genético la enzima ácido fosfatídico fosfatasa (PAP) de micobacterias, responsable de la defosforilación del ácido fosfatídico para generar diacilglicerol (DAG) que es el precursor directo de la síntesis de TAG.Materiales y métodos: con el fin de caracterizar la actividad PAP de micobacterias se procedió con la expresión heteróloga de putativas PAP en Escherichia coli. A su vez, se analizó la producción de DAG y TAG en la misma mediante la técnica de cromatografía en capa delgada (TLC).Resultados: se logró expresar la enzima PAP en distintas cepas de E. coli y se analizaron las variaciones en la síntesis lipídica mediante la marcación con 14C-acetato. A través de la técnica de TLC se pudo visualizar un aumento en los DAG cuando se indujo la expresión de la enzima PAP. Asimismo, se evidenció un aumento en la síntesis de TAG en una cepa de E. coli que expresa la enzima PAP y la enzima diacilglicerol aciltransferasa.Conclusiones: La expresión heteróloga de la enzima PAP de micobacterias mostró que esta enzima juega un rol importante en la síntesis de DAG y, por lo tanto, de TAG. Se espera que los resultados obtenidos en este proyecto contribuyan a entender en mayor detalle la vía de síntesis de TAGs en M. tuberculosis.