APLICACIÓN DE CULTIVOS ORGANOTÍPICOS PARA EL ESTUDIO DE LA EXPRESIÓN DE LAS DISTINTAS ISOFORMAS DE LA ONCOPROTEÍNA E6 DE HPV18.

BARBIERI, GUIDO; BUGNON VALDANO MARINA; MARZIALI, FEDERICO; CAVATORTA, ANA LAURA; BOCCARDO, ENRIQUE; GARDIOL, DANIELA

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología. II Congreso Latinoamericano de Virología.; 2015

Sociedad Argentina de Virología

Lospapilomavirushumanos(HPV)infectanepiteliosdeunagranvariedaddesitiosanatómicosylascorrespondientesproteínasviralesseexpresandiferencialmenteenlosdistintosestratosepiteliales.LosHPVseclasificancomodebajooaltoriesgo,segúnlasmanifestacionesclínicasasociadas.LacapacidaddetransformacióncelulardelosHPVdealtoriesgoestácodificadaenunpreARNmpolicistrónico,dondeuneventodesplicingalternativoquetienelugareneltranscriptodelosgenesE6/E7,conducealatraduccióndelasoncoproteínasE6yE7,yE6*(conocidacomoE6estrella).Dichasoncoproteínassonrequeridasparalareplicaciónviralinvivo,alavezqueseuneneinterfierenconlafuncióndeproteínascelularesclavesenproliferaciónydiferenciación.E6*consisteenunaformatruncadadelaproteínaE6completa,resultantedelaexclusióndeunexón.E6*regularíalaactividadesdeE6duranteelciclodereplicaciónviralyeldesarrollooncogénico;sinembargo,noseconoceenprofundidadlaexpresióndiferencialdeE6yE6*duranteelprocesodediferenciacióncelulardentrodelepitelioescamosodondesereplicaHPV,nilafunciónrespectivadecadaisoformadentrodelepiteliodurantelareplicaciónviraloeldesarrollodepatología.Másaún,dadalabajaabundanciadelasoncoproteínasvirales,lasmismassólohansidoestimadasatravésdesusARNcodificantesobienmedianteelusodemarcadoresindirectososubrogadosylainformacióndisponibleresultacontroversialenalgunoscasos.Porlotanto,enestetrabajooptimizamosherramientasmolecularesconelobjetivodepodercaracterizarlaexpresióndelasdiferentesisoformasdeE6delHPV18alolargodelepitelio,hastaelmomentodesconocida.Paraello,utilizamoslatécnicadeRealtimePCR,diseñandocebadoresespecíficosparaamplificarenformadiferencialcadaisoforma.estableciéndoseSeestablecieronlosparámetrosóptimosparacadareacción,habiéndoseensayadodistintosrangosdeconcentracióndecebadores,concentracionesdeenzimaydemagnesio,asícomodiferentestemperaturasdeanillado.Unavezlogradalaoptimizacióndedichasreaccionesdeamplificación,corroboramoslaeficienciaalcanzadaencadacaso.Además,dadalaestrecharelacióndelciclodereplicacióndeHPVconelprogramadediferenciacióndelosepiteliosqueinfecta,loscultivosorganotípicostiporaft,quereproducenepiteliosestratificadosinvitro,constituyenherramientasmuyútilesparaelestudiodeestosvirus.Utilizandolatécnicademicrodisecciónporcapturaláser,quepermitesepararcélulasúnicasopequeñosgruposdecélulasdemaneraselectiva,enestetrabajodiscriminamoscadaunodelosestratosdeuntejidoexpresandolasoncoproteínasvirales.Así,partiendodelasreaccionesdeamplificaciónpreviamenteoptimizadas,analizamoslospatronesdeexpresióndelasdosisoformasencadacapadelepitelioyenuncontextoqueasemejaunainfecciónporHPV.Porlodicho,estetrabajocontribuyealentendimientodelmecanismodesplicingalternativoquedaorigenalasdistintasproteínasE6,enelcontextodelepitelioescamoso.Caberecalcarlaimportanciadedichoevento,dadoqueregularíanosólolaexpresión,sinotambiénlafuncióndelasproteínasvirales.