Modificación de los sitios de unión a heparina en espermatozoides de verraco por efecto de la capacitación

DORA DAPINO; JUAN MANUEL TEIJEIRO; PATRICIA ESTELA MARINI; MARCELO O CABADA

Rosario, Argentina

Congreso; IX Congreso – XXVII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2007

Sociedad de Biología de Rosario

Se denomina capacitación al conjunto de cambios fisiológicos que experimentan los espermatozoides en el tracto femenino antes de la fecundación. Muchos de dichos cambios se relacionan con modificaciones en la arquitectura de la superficie celular. En estudios preliminares, observamos la unión específica y competitiva de la heparina a la membrana plasmática, la localización de sus sitios de unión predominantemente en la región de la cabeza y una modificación de los mismos en espermatozoides incubados en condiciones capacitantes, detectándose 2 patrones de tinción fluorescente, (A) fluorescencia portacrosomal y (B) fluorescencia acrosomal, con una disminución de (A) y un aumento de (B) durante la incubación. El objetivo del presente trabajo fue caracterizar y relacionar estos cambios en la topografía de unión de la heparina al espermatozoide, con el estado fisiológico de los mismos. Espermatozoides provenientes de 5 verracos adultos fueron incubados en medio TALP, tomándose alícuotas en 3 tiempos (0, 60 y 120 min.). Para el tiempo 0 se tomaron 2 alícuotas adicionales que se permeabilizaron con metanol y Triton X100, respectivamente. Todas las muestras fueron luego tratadas con heparina biotinilada/estreptavidina-FITC, y observadas con microscopio de epifluorescencia. La capacitación se estimó por: inducción de la reacción acrosómica con ionóforo de calcio A23187 y detección por quimioluminiscencia de la fosforilación de la proteína p32. Se determinó mediante ANOVA, que los valores de reacción acrosómica no difieren significativamente de los valores de patrón B en cada tiempo (p>0,05). La fosforilación de p32 fue detectada en el tiempo 60 y los espermatozoides permeabilizados con metanol o Triton X100, no mostraron un aumento significativo en el porcentaje de espermatozoides con patrón B (p>0,05). Estos resultados indican que la heparina se une en forma diferencial al espermatozoide en diferentes estados fisiológicos y dado que no se observan diferencias al permeabilizar la membrana, se infiere que los sitios de unión se encuentran en la superficie. Las modificaciones observadas estarían relacionadas con un proceso de redistribución molecular por efecto de la capacitación, lo que permitiría el desarrollo de una nueva técnica de tinción para el estudio y la evaluación de la capacitación en la especie porcina.