Localización de sitios de unión a heparina en la membrana del espermatozoide porcino

DORA DAPINO; FERNANDO CANE; PATRICIA ESTELA MARINI; MARCELO O CABADA

La Habana, Cuba

Congreso; VI Congreso Internacional de Ciencias Veterinarias y II Seminario Internacional de Salud Animal; 2007

Los cambios fisiológicos que experimentan los espermatozoides en el tracto femenino que les permiten fecundar  al ovocito, se denominan colectivamente capacitación. La mayoría de dichos cambios parece relacionarse con modificaciones en la arquitectura de la superficie celular en respuesta a componentes del medio. En trabajos anteriores observamos un aumento de la capacitación en espermatozoides porcinos incubados en medio TALP al suplementarlos con heparina; compuesto perteneciente al grupo de los glicosaminoglucanos sulfatados presentes en las secreciones del oviducto femenino. Con el objeto de localizar en el espermatozoide los sitios de unión a heparina durante la capacitación, se utilizó inmunofluorescencia indirecta, incubando espermatozoides de 5 verracos adultos, tomando alícuotas en distintos tiempos (0, 60 y 120 min). Cada alícuota fue incubada con heparina biotinilada y posteriormente con streptavidina-FITC. Una cuarta alícuota fue incubada además, con heparina sin biotinilar. La capacitación se estimó mediante la técnica de ionóforo de calcio A23187, que sólo permite reaccionar a los espermatozoides totalmente capacitados. Se observaron 2 patrones de tinción: (A) fluorescencia en región postacrosomal y (B) fluorescencia en región acrosomal, con una disminución de (A) y un aumento de (B) a lo largo del proceso de incubación. En la muestra con heparina sin biotinilar no se observó fluorescencia alguna. Se determinó mediante ANOVA, que los valores de reacción acrosómica con ionóforo no difieren significativamente del número de espermatozoides que muestran patrón B en cada tiempo de incubación (p>0.05). Estos resultados indican, que la heparina se une en forma específica y competitiva a la membrana del espermatozoide de cerdo, y que los receptores de heparina experimentan una redistribución en la membrana durante la capacitación. Ambos hechos podrían ser de utilidad en el desarrollo de una nueva técnica de tinción para evaluar capacitación y en el estudio del rol de los glicosaminoglucanos del oviducto femenino en este proceso.