Desarrollo de un ensayo para el tamizaje molecular del virus de hepatitis B.

PABLO E. CASAL; GERMÁN R. PÉREZ; ELISA M. BOLATTI; DIEGO CHOUHY; MIGUEL A. TABORDA; DANIELA GARDIOL; ADRIANA A. GIRI

Valparaíso

Jornada; XXII Jornadas Jóvenes de Investigadores de la AUGM.; 2014

AUGM

La transmisión de la infección por el virus de la hepatitis B (HBV) durante el período ventana serológico es una complicación transfusional de gran importancia. En países en desarrollo, los costos de los ensayos moleculares comerciales y la ausencia de desarrollos biotecnológicos regionales dificultan su aplicación en bancos de sangre. Nos propusimos desarrollar un ensayo de bajo costo para el tamizaje molecular de HBV, que incluya un control interno (CI). La metodología posee el siguiente formato: extracción de los ácidos nucleicos; amplificación mediante PCR multiplex (HBV y CI) con cebadores biotinilados; hibridación de los amplicones en fase liquida a sondas específicas conjugadas a fluoresceina; captura de los híbridos a una microplaca revestida con estreptavidina; detección con anticuerpo anti-fluoresceina y un cromóforo; lectura del color. La técnica de PCR multiplex fue optimizada para la coamplificación de HBV y del CI (fago P1), siendo la sensibilidad analítica del ensayo de 15 copias/reacción. Las pruebas realizadas con plasmas de pacientes con hepatitis B aguda, crónica y negativos mostraron alta especificidad y sensibilidad. La validación definitiva del método se realizará con el segundo Estándar Internacional de DNA de HBV, elaborado por la OMS. Este ensayo provee un sistema sensible, específico y de bajo costo para evaluar su aplicación en el tamizaje molecular de donantes de sangre que concurren al ámbito público de la provincia de Santa Fe (Argentina).