IBR 13079
INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR DE ROSARIO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
La depresión de Treacle en Danio rerio induce marcadores de apoptosis y estrés oxidativo
Autor/es:
MOUGUELAR, VALERIA; PORCEL DE PERALTA, MAURO; COUX, GABRIELA; CALCATERRA, NORA
Lugar:
Chascomús
Reunión:
Taller; II Taller de Biología Celular y del Desarrollo; 2014
Resumen:
El Síndrome de Treacher-Collins (TCS) es un desorden
congénito del desarrollo craneofacial asociado a mutaciones del gen TCOF1,
que codifica a la fosfoproteína nucleolar Treacle. Los mecanismos moleculares
responsables del síndrome se desconocen pero se ha sugerido que la apoptosis de
las células de la cresta neural craneal inducida por el déficit de Treacle
durante el desarrollo embrionario sería la causa de las malformaciones
asociadas al TCS. Recientemente, en células epiteliales pulmonares, se ha
propuesto que Treacle podría mediar protección frente a estrés oxidativo. En
nuestro laboratorio desarrollamos un modelo del TCS mediante la inyección en
embriones de oligonucleótidos morfolinos contra el ortólogo de pez cebra. En
este trabajo nuestros objetivos fueron: i-analizar la manifestación de
apoptosis mediante el estudio de marcadores asociados a muerte celular,
ii-estudiar la inducción de estrés oxidativo y la expresión de genes marcadores
inducidos por estrés.
A tal fin, embriones del pez cebra fueron microinyectados
con oligonucleótidos morfolinos inhibidores de la traducción de Tcof1 (TcofMO)
y morfolinos control (MisMO). Se estudió: la expresión del ARNm de Noxa, CyclinG1,
Trp53inp1 y Hsp70 (mediante RT-qPCR), los niveles de especies reactivas del
oxígeno (ROS) fluorométricamente mediante incubación con DA-DCFH y la
ocurrencia de apoptosis mediante tinción con Naranja de Acridina.
En los embriones TcofMO, Noxa presentó un aumento de
3.0 ± 0.4, CyclinG1: 3.5 ± 1.0, Trp53inp1: 1.4± 0.1 y Hsp70: 2.0 ± 0.6 en veces
de inducción respecto de los embriones MisMO. Los embriones TcofMO presentaron
un aumento significativo de ROS (MisMO=46.6 ± 1.2 y TcofMO=69.8 ± 2.5 UA,
p<0.001) y a su vez, se observó un incremento en el número de células
apoptóticas, especialmente localizadas sobre estructuras cefálicas.
En conclusión, el modelo de TCS en pez cebra presenta
un aumento de la expresión de genes marcadores de apoptosis en coincidencia con
lo hallado en el modelo de knock-out en ratón. También muestra señales
de un mayor estrés oxidativo lo cual podría ser un contribuyente a la
manifestación del síndrome.
