CARACTERIZACIÓN DE UNA FERREDOXINA 2[4Fe-4S] DE Leptospira interrogans

LÓPEZ RIVERO, ARLETH; MUSUMECI, MATÍAS A; CECCARELLI, EDUARDO A.; CATALANO DUPUY, DANIELA L.

Rosario

Congreso; XIII Congreso y XXXI Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario.; 2011

Sociedad de Biología de Rosario.

Las ferredoxinas (Fds) son pequeñas ferrosulfoproteínas  con bajo potencial redox, que actúan como dadores de electrones en diferentes vías metabólicas. Estas proteínas pueden agruparse en tres familias, las ferredoxinas con centros [2Fe-2S] que incluyen las tipo planta y tipo mamífero, las ferredoxinas [2Fe-2S] con plegamiento tipo tiorredoxina y las ferredoxinas 2[4Fe-4S] aisladas por primera vez a partir de bacterias anaeróbicas. Estas últimas pueden variar según el tipo de centro Fe-S que posean (3Fe ó 4Fe), el número (uno o dos), y la longitud de la cadena polipeptídica. Las ferredoxinas pueden actuar como sustrato de las ferredoxina-NADP+ reductasas (FNRs) en el metabolismo redox de plástidos, mitocondrias y bacterias. Hemos identificado y clonado a partir del genoma de Leptospira interrogans, una bacteria parásito de animales y humanos, una ferredoxina 2[4Fe-4S] (LFd2). Se ha logrado expresar y purificar la proteína recombinante con su centro Fe-S correctamente unido, a través de su co-expresión con el sistema de biogénesis de centros Fe-S de Escherichia coli (operón ISC). El protocolo de purificación se desarrolló dentro de un ambiente con bajo contenido de oxígeno molecular. El espectro de absorción de la LFd2 obtenida fue similar a los típicamente reportados para otras ferredoxinas bacterianas con centros [4Fe-4S]. Se ensayó la actividad citocromo c reductasa con la  FNR de L. interrogans y LFd2. Los resultados sugieren que la transferencia de electrones entre la reductasa y la LFd2 es óptima a un pH equivalente a 6,5 y en presencia de bajas concentraciones de NaCl. En este trabajo se informa la transferencia de electrones  entre una FNR de la clase plastídica y una ferredoxina de tipo bacteriana, proceso que no ha sido previamente observado en la naturaleza y que hemos identificado por primera vez en L. interrogans.