Screening de extractos de plantas para la búsqueda de compuestos bioactivos que interfieran con la lipoilación proteica en Staphylococcus aureus.

SCATTOLINI, A.; MANSILLA, M. C.; SORTINO, MAXIMILIANO; SVETAZ, LAURA

Rosario

Jornada; XV Jornadas de Ciencias, Tecnologías e Innovación; 2021

UNR

Las infecciones causadas por la bacteria Gram positiva Staphylococcus aureus resistente ameticilina (MRSA) constituyen un problema de salud global. La creciente aparición decepas multi-resistentes plantea una demanda social de estrategias alternativas para eldescubrimiento de nuevas drogas que controlen a los microorganismos a través demecanismos no explotados hasta el momento. En nuestro laboratorio nos proponemosidentificar compuestos que impidan la lipoilación de proteínas, una modificaciónpostraduccional esencial para el crecimiento y la virulencia de este patógeno. El ácidolipoico (AL) es un cofactor organosulfurado requerido para el funcionamiento decomplejos multienzimáticos involucrados en el metabolismo oxidativo y de un carbono. Eneste trabajo buscamos compuestos que interfieran con la síntesis de AL evaluando el efectode los mismos sobre el crecimiento de S. aureus NCTC 8325 en medio definido RPMI(Roswell Park Memorial lnstitute ), o el mismo medio suplementado con los productos delas enzimas lipoiladas (acetato y precursores de los ácidos grasos de cadena ramificada).Los compuestos candidatos serán aquellos que inhiban el crecimiento en RPMI, peropermitan el desarrollo en medios suplementados. Tras analizar el efecto de 100 extractosde plantas sobre la viabilidad de S. aureus se seleccionó el extracto 128. Sin embargo, elcrecimiento en RPMI en presencia del extracto 128 también se recobró al agregar sóloacetato, indicando que la inhibición se produciría sobre la actividad de la enzima piruvatodeshidrogenasa. Estos resultados se corroboraron al observar bandas de lipoilación enensayos de Western Blot con anticuerpos anti-AL sobre extractos de proteínas de la cepacultivada en presencia y en ausencia del extracto. Para dilucidar la naturaleza delcompuesto activo en el extracto 128 y poder comenzar su purificación se realizó un ensayode bioautografía. Tras la separación de los compuestos presentes en el extracto porcromatografía de capa fina, se volcó medio semisólido inoculado sobre esa placa estéril yse incubó a 3 7ºC durante toda la noche. La zona donde se ubicó un halo color crema, porinhibición del crecimiento bacteriano, corresponde a la migración del compuesto activo. Laidentificación y purificación del inhibidor resulta de interés para el desarrollo de nuevoscompuestos quimioterapéuticos dirigidos al tratamiento de enfermedades producidas porMRSA.