El envejecimiento celular involucra cambios en la expresión de la proteína coactivadora RAC3

RUIZ-GRECCO M; FERNANDEZ-LARROSA P; RUBIO F; ALVARADO C; MICENMACHER S; MARTÍNEZ-NOËL G; COSTAS M

Mar del Plata

Conferencia; SAIC; 2010

SAIC

Las células senescentes presentan arresto irreversible del ciclo celular y aumentan de tamaño. Presentan un metabolismo activo y actividad β-galactosidasa a pH ácido.  En ellas ocurren rearreglos en la estructura del ADN por heterocromatinización, induciendo cambios en el patrón de expresión génica, lo cual puede contribuir al desarrollo tumoral de otras células no senescentes. Ocurre por distintos mecanismos: acortamiento telomérico asociado a la vejez (senescencia replicativa) o acumulación de daños genómicos (prematura). Dado que RAC3 es un coactivador que interviene en el remodelado de la cromatina y contribuye al desarrollo tumoral, se investigó su posible participación en senescencia. Se desarrolló un modelo de senescencia prematura por inducción de daño al DNA con dosis subletales de H2O2 (150uM). Las líneas celulares 3T3L1 y T47D no respondieron al tratamiento con H2O2, mientras que las líneas  HEK293T, HEK293 y Wi38 presentaron un arresto del ciclo celular (24hs postratamiento). Se observó aumento en el tamaño nuclear a 6 días postratamiento (microscopia de fluorescencia y tinción con Hoescht) del 10%, 20% y 25% en las HEK293T, Wi38 y HEK293, respectivamente y aumento del porcentaje de células β-gal ácidas positivas a las 72hs de un  29% (HEK293) y 15% (Wi38) (al menos p<0,01 test Tukey).  Los niveles de RAC3 (WB) disminuyeron en respuesta a H2O2 0,45, 0,7 y 0,45 veces a las 72hs  en HEK293T, HEK293 y Wi38. El factor de transcripción anti-edad FOXO3A, que se inactiva por fosforilación, se activó 0,94, 0,74 y 6,28 veces en HEK293T, HEK293 y Wi38 a las 24hs post H2O2. Ensayos de inmunoprecipitación cruzada a las 24 hs post H2O2 sugieren que RAC3 y FOXO3A formarían parte de un mismo complejo. Se puede concluir que mientras altos niveles de RAC3 se asocian al desarrollo tumoral, bajos niveles acompañan al estado senescente, probablemente preservando la expansión de células con acúmulo de errores genómicos.