IDENTIFICACIÓN Y ANÁLISIS DE LA SECUENCIA PROMOTORA DE RAC3

ALVARADO C; MARTÍNEZ-NOËL G; MICENMACHER S; FERNANDEZ-LARROSA P; RUIZ-GRECCO M; RUBIO F; COSTAS M

Mar del Plata

Congreso; SAIC; 2010

SAIC

RAC3 es un coactivador de receptores nucleares y de NF-kB que está sobrexpresado en tumores hormono-dependientes e independientes y contribuye a su desarrollo. Para evaluar que secuencias regulatorias modulan su expresión se realizó el análisis bioinformático de su promotor. El gen de RAC3 de 155kb, se encuentra en el cromosoma 20 del genoma humano entre las posiciones 16326949-16481709 y codifica un transcripto de 7935pb. Se examinaron los sitios putativos de unión a factores de transcripción de una secuencia nucleotídica de 5kb (zona upstream del gen y parte de la zona 5’UTR) con los programas AliBaba2.1, ConSite y Genomatix. Se identificaron sitios consenso de unión a factores de transcripción p53, GR, PR, NF-kB y Snail sugiriendo que la expresión de RAC3 podría estar afectada por vías desreguladas en tumores (ej mTOR) y/o en las vías en las que RAC3 interviene. Además, se analizaron las zonas regulatorias del promotor RAC3 conservadas con otros mamíferos (Pan troglodytes-Mus musculus-Rattus norvegicus-Canis familiaris-Bos taurus-Monodelphis domestica). Encontramos 3 regiones altamente conservadas evolutivamente en la región de 5kb del promotor (ECR1-2-3) (ECR Browser). ECR1 se encuentra en la región 5’UTR y ECR2 y 3 a -5 y -4000pb respectivamente. Interesantemente, ECR1 y 2 se encuentran conservados entre todos los organismos analizados. Identificamos etiquetas blanco para NF-kB en ECR1-3 y para Snail en ECR2, remarcando la importancia de estos sitios en la regulación de RAC3. Para evaluar la actividad promotora se realizaron ensayos reporteros con un fragmento de 1kb del promotor de RAC3 río arriba del gen de la luciferasa, observándose un 20% menos de actividad en las células no tumorales HEK293 tratadas con Rapamicina 100nM (inhibidor específico de la vía mTOR) respecto a las sin tratar (p<0.001). Por lo tanto la vía mTOR participaría entre otras en la regulación génica de RAC3 aunque se debe dilucidar cuales de los factores predichos actúan específicamente.