Regulación por proteínas Shroom del canal de sodio epitelial sensible al amiloride (ENaC) expresado en ovocitos de Xenopus laevis.

OZU M.; MARINO G.; KOTSIAS BA.; ASSEF YA.

Mar del Plata

Congreso; LIV Congreso Anual de SAIC; 2009

Sociedad Argentina de Investigaciones Clínicas

El ENaC es un canal esencial para el movimiento del sodio en diversos epitelios y participa además en la migración celular, un fenómeno asociado al citoesqueleto celular. Para estudiar este fenómeno investigamos la regulación del ENaC  por proteínas Shroom relacionadas al citoesqueleto, esenciales en el desarrollo embrionario, una de cuyas formas, Shroom1 (APX) se expresa en forma endógena en los ovocitos. Se inyectó el mRNA de las tres subunidades del ENaC en ovocitos de Xenopus laevis y luego de 24-48 horas se midieron las corrientes sensibles a amiloride (INa(amil)) en un sistema de control de potencial. Se aplicaron pulsos de -100 a 60 mV en pasos de 20 mV y de 500 ms de duración desde un potencial de base de 0 mV. La INa(amil) fue definida como la diferencia entre las corrientes antes y después de 3-5 minutos de exposición a 2-10 µM amiloride. El potencial de membrana de los ovocitos inyectados con ENaC fue de -3 ±2 mV, menor que en los controles con agua (-39 ±11 mV), despolarización debida a un aumento en la concentración intracelular de sodio producto de la actividad de ENaC. Los ovocitos inyectados con ENaC generaron corrientes que fueron bloqueadas en forma reversible por el amiloride, con disminución de la magnitud de la INa(amil) en las sucesivas corridas (run down). La coinyección de oligonucleótidos antisentido para Shroom1 con las subunidades del ENaC redujo la INa(amil) comparadas con la coinyección de oligonucleótidos sentido para Shroom1 (pulso -100 mV: oligonucleótidos  antisentido: -1.20 ± 0.24 µA  y oligonucleótidos sentido: -6.50 ± 1.58 µA (n=17, p <0.001). Las corrientes en ovocitos inyectados con agua tenían un rango de nA (n=0.074± 0.024 µA, n=13). Dos posibilidades pueden explicar la reducción de la INa(amil) por el bloqueo en la síntesis de  Shroom1: un menor número de canales insertados en membrana o una disminución en la actividad de los canales por cambios en su conductancia o probabilidad de apertura.